文档介绍：蛋白质的定性定量分析第二章2020/7/151蛋白质的含量测定凯氏定氮法:1883年丹麦化学家Kjeldhl建立,经后人改良后形成的一种定量测定蛋白质最为精确、敏感的方法。原理:蛋白质的含氮量为16%,只要测出样品中氮的含量,即可计算出蛋白质的含量样品中蛋白质的含量=N×:1、消化:生物样品与浓硫酸共煮,样品蛋白质被无机化,其中氮元素转变为硫酸铵。Pr+H2SO4CO2+H2O+(NH4)2SO4(NH4)2SO4+2NaOHNH4OH+H2SO4NH4OH+HClNH4Cl+H2O2020/7/1532020/7/1542020/7/1552020/7/156凯氏法的评价:优点:缺点:1、适用于一切形态的样品;2、不用比色,对混浊不透明的样品也可进行分析;3、结果的精、准度较高。1、样品中含有非蛋白态氮时影响分析结果;2、组成蛋白质的氨基酸可影响分析结果;3、操作复杂,对操作者的要求高。2020/7/157Lowry法Lowry法原理:是在双缩脲法和Folin酚法的基础上建立的一种新的蛋白质定量方法。蛋白质在碱性条件下与铜离子反应生成紫红色络合物。然后再与Folin试剂反应生物深蓝色。颜色与蛋白质含量成正比,符合朗伯-比尔定律。2020/7/158方法评价优点1、可对多个样品同时进行分析,操作简便;2、结合Folin酚法,提高了分析的灵敏度;3、结合双缩脲法,避免了Folin酚法的局限。缺点1、比色测定,要求显色后溶液透明,且样品必需可溶;2、酚方式剂在碱性溶液中稳定性差,显色后需尽快比色;3、干扰反应的因素较多。2020/7/.