文档介绍：《基础生物学实验》精品课程实验 24 蛙类离体心脏灌流基础生物学实验(二) 《基础生物学实验》精品课程一. 目的要求 。 。 Na+ 、 K+ 、 Ca2+ 及肾上腺素( Adr )、乙酰胆碱( ACh )等对离体心脏活动的影响。《基础生物学实验》,可用人工灌流的方法,研究心脏活动的规律及特点;还可观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。《基础生物学实验》、蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、支架、双凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、滴管、培养皿(或小烧杯)、污物缸、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液、0 .65 % NaCI 、5% NaCl 、2% CaCl2 、1% KCl 、1: 5 000 肾上腺素、 1: 10 000 乙酰胆碱、 300U / ml 肝素。《基础生物学实验》 ,接通张力传感器输入通道。从显示器的“设置”菜单,弹出“设计实验标记”对话框, 选择“蛙心灌流”后,再从“实验项目”的“循环实验”中,选定“蛙心灌流”实验(用以标记实验)。所用仪器若无此设置,可以用通用标记作实验标记。《基础生物学实验》精品课程 2. 离体蛙心的制备制备离体蛙心的方法有两种。斯氏蛙心插管法和八木氏蛙心插管法,此处介绍斯氏蛙心插管法: 取一只蛙或蟾蜍,双毁髓后背位置于蜡盘中,按实验 4—1的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管。在左主动脉下方穿一线, 于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线,并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管,然后将盛有少量(套管内 2~ 3 cm 高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管,由开口处插入动脉圆锥。当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插人心室腔内(于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。《基础生物学实验》精品课程此时可见套管中血液冲人套管,并使液面随心脏搏动而上下移动, 表明操作成功(否则需遣回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液, 更换新鲜任氏液。稳定住套管后,轻轻提起备用线,将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液),再将结线固定在套管的小玻璃钩上,然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏,看清静脉窦的位置,于静脉窦下方剪断有牵连的组织,仅保留静脉窦与心脏的联系,使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血,使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致( — 2cm) ,即可进行实验。《基础生物学实验》精品课程 ,用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多,以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。注意:勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。《基础生物学实验》精品课程 (1) 记录正常心搏曲线。(2 ) 改用 % NaCl 溶液灌流,并作好加药标记,观察心搏变化。待曲线出现明显变化时,立即吸去套管中的灌流液,同时做好冲洗标记,并用新鲜任氏液清洗 2~3次,待心搏恢复正常。注意:换液时切勿碰套管,以免影响描记曲线的基线,同时保持灌流液面一致(以下同)。(3) 向套管内加 2—6滴5% NaCl (较细的套管需少加)溶液,作好加药记号,观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时,应立即吸去套管中的灌流液,并做好冲洗标记,迅速用新鲜任氏液清洗 2-3 次,待心搏恢复正常(4)同法向套管内加入 1~3滴2% CaCl2 溶液,观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时, 立即更换任氏液,待心搏恢复正常(如果恢复迟缓,可多次冲洗)。(5) 向套管中加 1-2 滴1% KCl 溶液,记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时同法更换灌流液,待心搏恢复正常。(6) 同法记录套管中加入 1~2滴的肾上腺素溶液(1: 5 000) 后心搏曲线的变化。(7) 同法记录套管中加入 1~2滴乙酰胆碱溶液(1: 10 000) 后心搏曲线的变化《基础生物学实验》精品课程 5. 整理记录,并将测量的心搏曲线数据填入表4—2。