文档介绍：卡波氏肉瘤病毒(KSHV)K1蛋白在血管内精品论文卡波氏肉瘤病毒(KSHV)K1蛋白在血管内皮细胞中的表达及其功能初探程晓东,薛敏,郝婷婷,秦娣,卢春5(南京医科大学微生物学与免疫学系,南京210029)摘要:目的:获得稳定表达卡波氏肉瘤病毒(KSHV)K1蛋白的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),探究K1蛋白对HUVECs增殖和迁移能力的影响。方法:从本实验室已构建好的含KSHVK1基因的重组真核表达质粒pCI-neo-K1中扩增出K1基因,克隆入慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZs-Green中构建重组质粒pHAGE-K1。利用脂质体将pHAGE-,。病毒感染HUVECs,Westernblot检测K1蛋白的表达。通过绿色荧光蛋白(GFP)流式分选、Westernblot验证获得稳定表达K1蛋白的HUVECs。通过细胞增殖实验和细胞划痕实验检测K1蛋白对HUVECs增殖和迁移能力的影响。结果:核酸序列测定证实,克隆的K1基因全长906bp,与GenBank中登记的K1基因100%同源。Westernblot15结果显示,含K1基因的重组慢病毒感染的HUVECs在约46kD处可观察到一特异性条带,K1蛋白的HUVECs增殖能力与对照组与预期的K1蛋白大小一致。流式分选获得稳定表达相比显著增强(P<),细胞迁移能力亦明显增加(P=)。结论:成功包装了含KSHVK1基因的重组慢病毒。KSHVK1蛋白能够促进HUVECs增殖和迁移。关键词:KSHVK1蛋白;增殖;迁移20ExpressionofKSHVK1proteininvascularendothelialcellsandpreliminarystudyonitsfunctionCHENGXiaodong,XUEMin,HAOTingting,QINDi,LUChun(DepartmentofMicrobiologyandImmunology,NanjingMedicalUniversity,NanJing210029)25Abstract:Objective:Toobtainhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs):ThefragmentofK1genefromexpressionplasmidpCI-neo-K1wasclonedintothelentivirusvectorpHAGE-CMV-MCS-IZs-Green,binantplasmidpHAGE-K1,--,HUVECsstablyexpressingKSHVK1proteinwereobtainedbyflowcytometryassay(FCM),K-8assayandwound-:NucleicacidsequencingconfirmedthatclonedK1genewas906bp,wihchwas100%--8andwound-:essfully,andK1proteincouldpromoteth