文档介绍：标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法(编制说明)标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法(编制说明)核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法编制说明(征求意见稿)一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会《二О一五年国家标准制修订项目》,项目编号“20154060-T-424”。本项任务由中国标准化研究院提出并归口,定于2016年完成。本标准起草工作组由中国标准化研究院、浙江工商大学、河北农业大学等单位共同组成。二、目的及意义核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键,在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶,其本质均是蛋白质。但是不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于底物RNA,通常称为核糖核酸酶(RNase),有些核酸酶只能作用于底物DNA,称为脱氧核糖核酸酶(DNase),核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶统称为核酸酶(Nuclease)。核糖核酸酶是一类广泛存在于动植物体内的核酸水解酶,从20世纪60年代以来一直作为一种模型蛋白被普遍用于分子生物学研究。RNase家族包括RNaseA、RNaseB、RNaseC、RNaseH、S-RNase、RNaseP、RNaseT等,主要生理功能是控制细胞内RNA的种类与数量分布,除参与核糖核酸转录后的剪切、修饰和降解等过程外,还与某些植物的自交不亲和性、器官发生、宿主的防御机制、控制肿瘤血管生成、杀灭肿瘤细胞及抑制病毒复制等有关。其中核糖核酸酶A一般被认为是核糖核酸酶的典型代表,,通过X射线衍射和质谱分析结果表明,它的空间结构呈肾形分布,见图1。脱氧核糖核酸酶是将单链或双链DNA同等程度地随机分解,生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。脱氧核糖核酸酶的主要用途包括制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7,T3,,1/15,标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法(编制说明)SP6等RNAPolymerases催化的RNA转录后去除DNA模板;DNaseIFootprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(Nicktranslation);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照等。脱氧核糖核酸酶I一般被认为是脱氧核糖核酸酶的典型代表,分子量约32kDa。由于核酸酶(核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶)具有重要的生理学作用,引起了广泛的关注。目前已经商业化生产和销售,但是作为核酸酶的重要质量指标之一的酶的纯度,根据文献调研显示相应的测定方法目前仍然没有形成统一的检测和分析标准,各生产和销售厂商对其纯度的质量控制各自定义,甚至有些厂商仅是标明了核酸酶的蛋白含量,混淆了核酸酶的纯度概念。这实际上已经成为核酸酶产品可持续发展的瓶颈问题,给消费者造成了极大的不便。鉴于此,开展核酸酶纯度检测方法标准的制定,具有重要的现实意义,可有助于规范市场上此类产品的乱象,切实保障消费者的使用。经济全球化浪潮使标准竞争上升到了战略地位,特别是进入21世纪以后,发达国家纷纷制定各自的标准化发展战略,以应对因经济全球化对自身带来的影响。此外,此类标准的制定也同样满足《国家中长期科学和技术发展规划纲要(2006-2020年)》中明确把实施技术标准战略作为我国科技发展的两大战略之一的目标,有助于保障国家科学发展。图1牛胰腺核糖核酸酶A空间结构三、标准制定原则及主要内容(一)标准编制原则,2/15,标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法(编制说明)标准的制定过程中采用文献调查法、专家座谈法、凝胶电泳方法等多种研究方法,方法科学先进、过程周密严谨、数据真实可信、结果明确。本标准是为相关组织核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测提供技术支撑,考虑到生产、监管等不同需求,在方法选择上,主要基于现状、现有成熟的技术以及结果及验证基础确定的,因此实用性较强。(二)标准制订主要依据1、-2009《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》的有关要求。2、标准编写内容参考了与核酸酶纯度检测相关文献,标准参照了GB/-2004《测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)》第1部分总则与定义和GB/-2004《测量方法与结果的准确度》第2部分确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法。(三)本标准的主要内容本标准主要包括以下7个部分:(1)范围;(2)术语和定义;(3)原理;(4)仪器设备及器具;(5)主要试剂;(6)分析步骤;(7)结果分析等。四、主要工作过程(一)组成标准起草小组根据国家制修订有关程序和要求,2015年10月下旬,中国标准化研究院主持召开了《核酸酶纯度检测》国家标准制定