文档介绍：体外放射配体 结合分析
采用放射性核素标记物为示踪剂,以特异性结合反应为基础,以放射性测量为定量手段,在体外对微量活性物质进行定量检测的一类分析技术
放射性竞争结合分析
放射免疫分析 RIA
放射性非竞争结合分析
免疫放射分析IRMA
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概念-体外放射配体结合分析
分类
体外放射配体结合分析优点
灵敏度高
特异性强
放射性核素不引入体内
应用范围广
被测样品用量小
操作简便
易于自动化
放射免疫分析 RIA
基本原理*
竞争性结合的抑制反应
非标记抗原(检测对象或标准品)
标记抗原
抗体限量
标记和非标记抗原具有相同的免疫活性
同时与限量的抗体进行免疫结合反应
彼此竞争相互抑制
反应式*
*Ag+ Ab *Ag-Ab+ *Ag
+
Ag 限量
Ag-Ab + Ag
Ag: 待测抗原
*Ag: 标记抗原
Ab: 抗体
Ag-Ab: 抗原抗体复合物
*Ag-Ab: 标记抗原抗体复合物
放射免疫分析技术原理示意
标准曲线
即标准品,与待测物具有相同的化学结构、免疫学活性,
基本试剂
标准抗原
标记抗原
特异性抗体
分离试剂
是RIA的示综剂,125I,纯度高,合适的比活性,标记后抗原免疫活性不受破坏
特异性高,滴度高,亲和力大
分离方法
第二抗体优点:特异性强,分离效果好,适合自动化。缺点:二抗用量大,成本高,两次温育,操作时间长
双抗体法
沉淀法
吸附法
固相法
中性盐和有机溶剂硫酸钠,硫酸铵及聚乙二醇(PEG)等优点:来源容易,价格便宜,分离快速,不需二次温育。缺点:结果易受T,PH,试剂浓度等因素影响。
活性炭硅酸盐离子交换树脂优点:简单,快速,经济,材料来源广。缺点:专一性差,影响因素多
免疫吸附法优点:固相材料来源广,价格低,分离不用离心,简单,快速。缺点:制备固相试剂费时,费事;抗体活性的回收率低;大分子抗体与固相连接时会造成亲和力下降,灵敏度受影响