文档介绍：一、高效液相色谱法:
特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上,采用了高压泵、化学
键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实
验技术建立的一种液相色谱分析法。

高灵敏:10-9g (紫外检测)、10-11g (荧光检测)
高效液相色谱分析法 HPLC
(High Pertormance Liquid Chromatography,)
§2-1 高效液相色谱法及其特点
二、HPLC特点
1、适于溶解后能制成溶液的样品(包括有机介质溶液),不受样品挥发性和热稳定性的限制,对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测,用途广泛,占有机物的80%
2、流动相为液体,流动相与组分间有亲合作用力,能提高柱的选择性、改善分离度,对分离起正向作用。且流动相种类较多,选择余地广,改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用,当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。
3、室温;高压(液体粘度大,峰展宽小)
三、HPLC的特点和实际应用
1、利用其高柱效(n=104片/米),有效分离极复杂
体系中的痕量组分。
正相色谱分离有机溶剂中的物质
反相色谱分离水溶液中的物质----生化物质。
2、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对
色谱法分析离子型体的含量。(蛋白质、氨
基酸、常见阴阳离子等)
3、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分
离高分子化合物。
4、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化
合物。
1. 固定相与装柱方法的选择:
选粒径小的、分布均匀的球形固定相
(dp≤10μm)
首选化学键合相,匀浆法装柱
2. 流动相及其流速的选择:
选粘度小、低流速的流动相——甲醇,
约1ml/min
3. 柱温的选择:
选室温250C左右
四、HPLC法中分离条件的选择
:利用组分在两相中溶解度的差异
:载体+固定液(物理或机械涂渍法)
缺点:系统内部压力大,易流失,不实用
固定液——极性→NL