文档介绍：新穿心莲内酯在体内外抗炎活性研究新穿心莲内酯在体内外抗新穿心莲内酯在体内外抗炎活性研究炎活性研究选自: 选自: The American Journal of The American Journal of Chinese Medicine Chinese Medicine SCI SCI 影响因子影响因子 Abstract ?新穿心莲内酯,是一个来自穿心莲植物的一种提取物。本文主要研究新穿心莲内酯在体内和体外的抗炎作用及机制。研究发现口服新穿心莲内酯( 150 毫克/千克)显着抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀。口服新穿心莲内酯( 100 – 150 毫克/千克)也能减少醋酸致小鼠血管通透性增加。在体外进行研究,利用巨噬细胞系 RAW 探讨新穿心莲内酯抑制 phorbol-12-myristate-13-acetate 刺激呼吸系统和脂多糖诱导产生一氧化氮、肿瘤坏死因子(肿瘤坏死因子-α)。?通过光学测量,结果显示新穿心莲内酯抑制有刺激因子刺激呼吸系统产生炎症因子,新穿心莲内酯抑制 LPS 诱导的巨噬细胞产生的一氧化氮和肿瘤坏死因子- α,促进抗炎活性的作用。这些结果表明,新穿心莲内酯具有显著的抗炎作用。?关键词:新穿心莲内酯;耳水肿;血管通透性;一氧化氮;肿瘤坏死因子-α; 巨噬细胞炎症。 Materials and Methods ?制备新穿心莲内酯的主要方法:冷浸法,干叶(1千克)被浸渍在 95% 乙醇在室温下保存三天。过滤后,乙醇溶液是在真空蒸发去除溶剂。残留( 320 克)浸膏用乙酸乙酯对水和乙酸乙酯部分( 45 克)在硅胶柱进行层析,洗脱用石油醚/***( 7 : 3 ),产生 2克纯新穿心莲内酯。新穿心莲内酯的化学结构鉴定红外,紫外,核磁共振和质谱等进行测定。其纯度大于 96% ,以高效液相色谱分析(图 1)。该新穿心莲内酯溶解在二***亚砜( DMSO )存放在? 20 o的环境中。?其他化学试剂:醋酸豆寇酯、内***(脂多糖),青霉素,链球菌霉素,鲁米诺(苯巴比妥),三乙***和其他生化试剂等。醋酸豆寇酯溶解在 DMSO 中, 脂多糖( 50 μ克/毫升)不是加入的磷酸缓冲溶液。都存放到-20 o C 的环境中。?实验动物:小白鼠( 28 ±2克) ?抗炎活性的新穿心莲内酯化学结构?实验一:二甲苯引起的小鼠耳肿胀?局部应用二甲苯 50 微升,涂于老鼠的左耳,右耳为对照。新穿心莲内酯分为三个不同的剂量( 50 , 100 和 150 毫克/千克) 一小时前让小白鼠口服,再加一组地塞米松( 20 毫克/公斤)作为阳性对照实验二:醋酸刺激诱导小鼠内脏痛模型把小鼠分成 5组,分别给予动物腹腔注射 1毫升/100 克醋酸( % ,体积比)。 30 分钟后注射醋酸和腹腔冲洗正常盐水( 3毫升) 1小时后口服新穿心莲内酯( 50 , 100 和 150 毫克/千克), 毫升伊万斯蓝染料( % 生理盐水)静脉注射部位在尾静脉。对照组注入地塞米松( 20 毫克/千克)同等剂量和生理盐水相比较。在 610 纳米条件下对染料进行检测。?实验三:新穿心莲内酯对 LPS 诱导的巨噬细胞中一氧化氮生产的影响?新穿心莲内酯并没有显著影响基底原料 巨噬细胞。然而,新穿心莲内酯在没有生产的巨噬细胞治疗内***的情况下是剂量依赖性地抑制内***(图 4),在浓度从 30 到 150 μm。结果的基础上的微量细胞活力检测,新穿心莲内酯无毒性从 30 到 90 μm(细胞存活超过 95% 与对照组相比)。只有在最高剂量( 150 μm), 一些细胞(细胞存活率明显低于 65% 与对照组相比)。?实验四:在 LPS 诱导的巨噬细胞下新穿心莲内酯对肿瘤坏死因子-α生产的影响。?肿瘤坏死因子-α是一个重要的炎症介质分泌的脂多糖,诱导 巨噬细胞系巨噬细胞。图 5显示,新穿心莲内酯从 30 到 150 μm,肿瘤坏死因子-α浓度在 LPS 处理组剂量依赖性减少,相比于对照组在无脂多糖诱导下。