文档介绍：实验报告王唯一精942009010604同组人:刘昕汪梦婕环境中微生物的监测和分离纯化一、 实验目的学****并掌握无菌操作技术原理和方法学****用稀释涂布法分离微生物认识微生物存在的普遍性,体会无菌操作的原理二、 实验原理为微生物提供适宜培养它的营养、酸碱度、温度和氧等条件,使其正常生长。三、 实验材料与试剂1>土祥10g,无菌生理盐水2、取液器(1000微升1支),培养箱,培养皿,无菌有帽试管,三角瓶,无菌涂棒,接种环,1000微升无菌吸头若干,记号笔,酒精灯,火柴,试管架四、 实验步骤(一) 培养基的制备按以下步骤冽备牛肉膏蛋白豚平板培养基,每组18-20个平板成分:,蛋白豚3g,***,自来水300ml制法:于500ml三角瓶内加入以上成分,混合溶解。〜().1Mpa灭菌20分钟,冷却到60度左右,采用叠皿法把培养基倒入灭好菌的90mm培养皿中,制作无菌平板,凝固后倒置待用。(二) 周围环境中微生物的检测在牛肉膏蛋白腺培养及平板上做如下实验:取一个培养皿,分区,做好标记,分别于培养基不同区内接种实验手套、书、餐卡、手表上的细菌(进行涂抹)取一,个培养基,分区,分别用未细的手指、自来水洗过的手指、洗手液洗过的手指、肥皂洗过的手指涂抹培养基将以上培养基用报纸包好倒置于37度培养箱里培养24小时观察结果(三)从土壤中分离微生物I采土样选择较肥沃的土壤,铲去表层土,挖5-20cm深的土壤数十克,装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口,做好编号记录,带回实验室共分离用。制备土壤稀释液称取土样lg,放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,置摇床震荡5分钟使土壤均匀分散成为土壤悬液。用1ml的无菌吸头从中吸取1ml土壤悬液,注入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,吹吸三次,震荡均匀,制成稀释度为10・4的土壤溶液。逐次取1ml土壤溶液分装到灭萌后的Eppendorf管中,发给每个小组备用。涂布用一只新的无菌吸头,由稀释好的土壤稀释液中吸取100微升,较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白腺培养基平板上,用无菌玻璃涂棒涂布均匀,一定要多涂几遍,从概率角度来说,涂布时间越长越好(1〜2分钟),使细菌均匀分布,此步是实验成功的关键。培养将牛肉蛋白腺培养基平板倒置于37度温箱中培养24小时•,统计所长出的菌落数。5菌落计数培养‘24小时后,取出培养平板,算出同一小组几个平板上的菌落的平均数,换算出土样中的菌数。土壤中的细菌含量(个/g土壤)=菌落平均数*10*稀释倍数有较大片菌苔生长时,弃用,以无大片菌苔生长的培养皿计数;若成片菌苔大小不到培养皿的一半,其余一半分布均匀,将此一半计数*2五、 实验结果(试验品/菌落数)手套27书4餐卡3手表22未洗的手指34自来水洗过的手指33洗手液洗过的手指1肥皂洗过的手指1024土壤30,18,12(*10*稀释倍数=细菌含量)(三个样本)六、 实验讨论无菌操作要在酒精灯旁进行,同时不能离火焰太近;培养皿的盖要开小一点,以免空气中杂菌混入;操作要迅速。日常生活中吃剩的食物要尽量密封保存,如加保鲜膜,饭前要洗手在锅中盖着锅盖可以避免空气中杂菌的进入,且锅内环境不适宜细菌生长,因此不易坏,而在碗中食物没有与空气隔绝,且开放的环境与室温适宜细菌生长,因此易变质。由于未洗的手与用自来水洗过