文档介绍：1实验十二 液相色谱仪的使用实验时间:2004年12月25日     第三组:周炜     学号:02321013一、实验目的(一)掌握Waters HPLC的基本结构及工作原理;(二)了解Waters HPLC的性能特点及应用范围;(三)熟悉Waters HPLC的操作步骤。二、基本结构及工作原理高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术,随着不断改进与发展,目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。高效液相色谱法包括四种基本类型:分配色谱(PC)、吸附色谱(AC)又称液固色谱(LSC)、离子交换色谱(IEC)、尺寸排斥色谱(SEC)又称凝胶色谱(GC)。(一)基本结构及工作流程高效液相色谱仪可分为4个主要部分:高压输液系统;进样系统;分离系统;检测系统。此外还配有辅助装置:梯度淋洗装置;自动进样装置;数据处理器等。其结构示意图如下。首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱,然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时,流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离,然后依先后顺序进入检测器,记录仪将检测器送出的信号记录下来,由此得到液相色谱图。(二)分配色谱法的基本原理分配色谱法是四种高效液相色谱法中应用最广的一种,它的原理类似于溶剂萃取。一般将分配色谱分为液液分配色谱(LLPC)和化学键合相分配色谱(CBPC)两类。本实验采用化学键合相分配色谱法。-液色谱中,流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析,无论是极性的和非极性的,水溶性和油溶性的,还是离子型的和非离子型的化合物。液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同,都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同,具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的,使这种分配平衡可反复多次进行,造成各组分的差速迁移,提高了分离效率,从而能分离各种复杂组分。。它代替了固定液的机械涂渍,因此它的产生对液相色谱法迅速发展起着重大作用,可以认为它的出现是液相色谱法的一个重大突破。它是目前应用最广泛的一种固定相。据统计,约有3/4以上的分离问题是在化学键合固定相上进行的。采用化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法,简称键合相色谱。由于键合固定相非常稳定,在使用中不易流失,适用于梯度淋洗,特别适用于分离容量因子k值范围宽的样品。由于键合到载体表面的官能团可以是各种极性的,因此它适用于种类繁多样品的分离。三、性能特点及应用范围(一)高效液相色谱仪的特点及应用范围高效液相色谱仪是在经典液相色谱基础上,引入了气相色谱的理论,在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器,因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。:使用新型填充物,粒度可小于50微米,每米色谱柱的塔板数达5000以上。:采用高压输液泵,流动相压力高达300千克力/厘米2以上,流速远比经典液 相色谱法为快,分离速度可与气相色谱法相比。:流出液流经紫外或荧光等检测器,可直接检出低至10-13~10-10克的物质。:可以测定高沸点、热不稳定等不宜于用气相色谱法测定的大分子量的化合物。环