文档介绍：检测原理阿尔玛蓝(AlamarBlue)是一种氧化还原指示剂,能根据代谢活性产生吸亮度变化和荧光信号。这是一种安全无毒的染料,可用于细胞活性和细胞增殖的定量分析以及细胞因子生物测定和体外细胞毒性研究,能有效测定动物、真菌和细菌细胞的天然代谢活性。AlamarBlue在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性,而在还原状态下,转变为呈粉红或红色荧光的还原产物,反映所研究的细胞或微生物对氧分子的消耗,因而常被用作氧化还原指示剂,以显示被观察细胞和细菌的代谢活动。这种测定是基于具有代谢活性的细胞将试剂转换成荧光和比色指示剂的能力。在细胞增殖过程中,细胞内NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMNNADH/NAD的比值升高,处于还原环境。摄入细胞内的染料被这些代谢中间体及细胞色素类还原后释放到细胞外并溶于培养基中,使培养基从无荧光的靛青蓝变成有荧光的粉红色。受损和无活性细胞具有较低的天然代谢活性,因此对应的信号较低。可以用普通分光光度计或荧光光度计检测,其激发光波长在530-560nm 之间,发射光波长为 590nm。吸光度和荧光强度与活性细胞数成正比。本品可广泛地用于细胞增殖代谢,药物的细胞毒作用的体外测定以及病原微生物的的快速检测与鉴定。与台盼兰、TTC、MTT、MTS等分析法相比, AlamarBlue 具有更多的优势。 AlamarBlue 采用单一试剂,可以连续、快速地检测细胞的增生状态。由于 AlamarBlue 对细胞无毒、无害,不影响细胞的抗体合成与分泌等活性,因此可以对同一批细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察,因此有操作简便和几乎不干扰细胞正常代谢的特点。运输与保存方法冰袋(wetice)运输。产品 4oC避光保存,至少一年有效。注意事项1)需客户自行准备 100%还原型AlamarBlue 试剂。为得到还原型AlamarBlue,需配制AlamarBlue与细胞培养基的混合溶液,AlamarBlue与细胞培养基的比值为1:10,高压灭菌15min(。不能对浓缩的AlamarBlue高压灭菌,也不能用PBS配制溶液,因为100%还原型AlamarBlue在PBS中不稳定。)2)为得到最好的结果,建议实验前先摸索孵育时间和接种细胞数量。3)合适密度的细胞可以增加检测灵敏度。对于96孔板,我们建议每孔接种100微升细胞,细胞浓度范围为:贴壁细胞在100-10,000/孔,悬浮细胞在2,000-50,000/孔,并以培养基为空白对照。对于384孔板,细胞浓度和接种量均减半。4)整个过程均应为无菌操作,因为微生物污染物同样可以还原检测试剂而影响实验结果。5)注意接种细胞浓度和加入检测试剂后孵育时间。细胞浓度过高或孵育时间过长, 会导致继发性还原反应,产生无色和荧光消失。6)孵育时,须避光。7)本产品可以使用荧光或分光光度计检测,但荧光的灵敏度高,实验误差小,推荐使用荧光检测。操作说明一、制作标准曲线(测定最佳孵育时间和细胞数量)每孔加入100微升细胞悬液(对数生长期细胞),对细胞计数。按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。注:设置阴性对照:细胞培养基中不加入细胞;阳性对照:100微升100%还原型AlamarBlue(不含