还原糖含量测定.doc

文档介绍：二、还原糖含量的测定葡萄糖标准溶液:(葡萄糖在98~100℃先烘干至恒重,干燥冷却,再称量)1mg·mL-1葡萄糖标准液:准确称取1g的无水葡萄糖,待溶解后定容至1000mL。DNS显色液:准确称取无水的3,5-。无水氢氧化钠40g溶解后移入500mL容量瓶,冷却后定容。将水杨酸溶解液移入1000mL容量瓶并加入325mL的氢氧化钠,再加入15mL丙三醇溶解定容至1000mL贮存于棕色试剂瓶中。以上试剂均为分析纯。水为蒸馏水。采用3,5—二硝基水杨酸比色法:还原糖测定液的制备:××g,放入50ml容量瓶中加入25ml蒸馏水,置沸水浴中加热20min,其间摇动数次,取出立即加入2ml乙酸锌(219g/L)溶液和2ml亚铁***化钾(106g/L)溶液,摇匀,冷却,定容至50ml容量瓶中,过滤,滤液备用。标准曲线的制作:用移液器准确吸取0、2、4、6、8、10、12、14、16ml……的葡萄糖标准溶液,分别置于50ml容量瓶中,用蒸馏水补充至约20ml,加3,5—二硝基水杨酸溶液5ml,至沸水浴中煮5min进行显色,取出后以流水冷却,定容,摇匀。20min后比色。用试剂空白调零,用分光光度计在510nm波长处测定吸光值(A),以吸光值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,绘制标准曲线。样品的测定:用移液器吸取样品溶液5ml,置于50ml容量瓶中,加3,5—二硝基水杨酸溶液5ml,至沸水浴中煮5min进行显色,取出后以流水冷却,定容,摇匀。20min后比色。用试剂空白调零,用分光光度计在510nm波长处测定吸光值(A)。结果计算:在标准曲线中查出相应的还原糖含量,按以下公式计算样品中还原糖的百分含量。还原糖(%)=×100式中,分取倍数:50/5=10换算成:还原糖(%FW)=还原糖(%DW)×干物质(%)