文档介绍：1第十章第十章免疫细胞学技术免疫细胞学技术 2第一节第一节免疫细胞分离技术免疫细胞分离技术 1 1、自然沉降法、自然沉降法 2 2、聚合物加速沉降法、聚合物加速沉降法明胶明胶右旋糖酐右旋糖酐 PVP PVP 一、白细胞分离 3二、外周血单个核细胞的分离二、外周血单个核细胞的分离 d d 2 2[ [?? c c - - ?? m m (X) (X)] ]V V (X) (X) = = × × g g 18 18 ??(X) (X) 利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法 4 形成密度梯度的介质形成密度梯度的介质 2. Ficoll Ficoll 3. Isopaque Hypaque Isopaque Hypaque 泛影葡***( 泛影葡***( Urografin) Urografin) 4. ***聚乙烯吡咯烷*** 51 1、、 Ficoll Ficoll 分离法分离法分离介质: 分离介质: Ficoll-Hypaque Ficoll-Hypaque 原原理: 理: Ficoll-Hypaque Ficoll-Hypaque 密度: 密度: 主要材料: 主要材料: 淋巴细胞分离液淋巴细胞分离液 RPMI1640 RPMI1640 培养液培养液离心管等离心管等肝素抗凝血肝素抗凝血分离过程: 分离过程: 67 结结果: 果: 效果评价: 效果评价: 得率得率纯度纯度活力活力注意事项: 注意事项: 密度的选择密度的选择加样界面加样界面活力检查活力检查 82 2、、 Percoll Percoll 分离法分离法 d d 2 2[ [?? c c - - ?? m m (X) (X)] ]V V (X) (X) = = × × g g 18 18 ??(X) (X) ? c - ? m (X)=0 9 ??原理: 原理: ??主要材料: 主要材料: ??分离过程: 分离过程: ??结果: 结果: (1) (1) 连续连续 BSA BSA 密度梯度离心法密度梯度离心法 10三、三、淋巴细胞分离技术淋巴细胞分离技术(一)淋巴细胞的纯化(一)淋巴细胞的纯化 1 1、红细胞的去除、红细胞的去除低渗裂解法低渗裂解法***化铵裂解法***化铵裂解法 2 2、血小板的去除、血小板的去除 3 3、单核细胞的去除、单核细胞的去除黏附贴壁法过柱吸附法磁铁吸附法