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及转染表达对细胞作用的研究地鳖纤溶活性蛋白基因克隆广东工业大学硕士学位论文代春迎分类号:密级:11845学号:指导教师姓名、职称:递笪钧教授企业导师姓名、职称:无专业或领域名称:生物化工学生所属学院:轻工化工堂院论文答辩日期:目目UDCぱ妒1
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摘要调取地鳖纤溶蛋白酶,然后通过克隆将地鳖纤溶蛋白基因连接到上,pCDNA31(+)EFPs180G418时表明地鳖纤溶蛋白基因可用来构建抗肿瘤肿瘤基因治疗的载体。但由于地鳖纤地鳖虫是一种药用历史悠久的中药材,通过现代生物提取技术,本实验室从中提取出一种具有纤溶活性的蛋白酶,即地鳖纤溶蛋白。通过研究发现,该蛋白不仅有很好的溶栓效果,同时对许多肿瘤细胞具有很好的抑瘤作用。深入研究发现,该蛋白能够抑制血管的生成,从而可截断肿瘤细胞的营养来源,将肿瘤细胞“饿”死。本文采用转基因技术将地鳖纤溶蛋白基因转入细胞中,通过其表达,观察是否对癌细胞生长有一定不利影响,以证明该蛋白的抑瘤作用。本实验通过参照实验室调取的地鳖纤溶蛋白基因,选择适宜载体克隆位点的酶切位点,设计适当的引物,通过提取地鳖总醋B糲谝涣矗琍PCR筛选稳定表达系细胞。同时观察记录细胞形态。提取稳定表达系细胞的胞内蛋白,SDSPAGEpCDNA31(+)EFPs180形变为圆形,同时细胞粘附性降低,贴壁生长减弱,在细胞培养液内出现絮状“葡萄串样”细胞簇。通过检测发现地鳖纤溶蛋白能够在细胞内表达,导致上述现象的产生。说明地鳖虫纤溶蛋白具有抗肿瘤细胞粘附侵润,转移等功效,同溶蛋白抗肿瘤的机制还不清楚,还有大量的工作要做。关键词:地鳖虫,纤溶蛋白,基因克隆,转染,细胞
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