文档介绍：实验一巨噬细胞吞噬功能实验ﻫ1、【实验原理】(1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统得主要细胞,具有活跃得吞噬功能、能清除体内抗原物质及变性得细胞,在特异性及非特异性免疫中均起重要作用、MΦ受抗原刺激后活化,可使其吞噬功能明显增强。(2)此实验采用体内法,即:在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min后处死小鼠,取出腹腔液,以冷美蓝染色,油镜下计数吞噬鸡红细胞得百分数,及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色得鸡红细胞得形态、数目,以判断巨噬细胞中得杀伤能力,由此间接地测定机体得非特异免疫水平、2、【实验步骤】(1)试验前3d,小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。(2)实验时,每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml,轻揉腹部,使红细胞在腹腔中分布均匀,利于吞噬(3)30min后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用吸管取出腹腔液,均匀涂布于载玻片上,然后再滴一小滴0、03%冷美蓝溶液,盖上盖玻片。ﻫ(4)低倍镜下找到观察区域后,换高倍镜下进行观察,计数3、【实验结果】4、【结果分析】(1)如图所示,在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞得现象,并且可以瞧到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。(2)镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬得鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。(3)由于未将腹腔液与冷美蓝溶液充分混合均匀,使得视野中出现大片深染区域。总体实验结果较好,视野中央可见清晰得吞噬了鸡红细胞得巨噬细胞、ﻫ5、【注意事项】 (1)涂片得薄厚要适当,否则影响计数、(2)小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。 (3)如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水、 (4)剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。 (5)被吞噬得鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间、实验二双向琼脂扩散实验1、【实验原理】(1)可溶性抗原与相应抗体特异性结合,两者比例适当并有电解质存在及一定得温度条件下,经一定得时间,可形成肉眼可见得沉淀线/环得现象,称为沉淀反应、(2)琼脂扩散就是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现得一种沉淀反应。当对应得抗原、抗体在半固体琼脂终相遇,且二者比例适当时,便出现可见得白色沉淀线,这组沉淀线就是一组抗原、抗体得特异性复合物。当琼脂中有多组不同得抗原、抗体存在时,便各自依其扩散速度得差异,再适当得部位形成独立得沉淀线。因此,琼脂扩散不仅用于疾病得诊断,更广泛地用于抗原成分得分析。(3)双向琼脂扩散试验就是定性实验。将可溶性抗原与相应抗体分别加人琼脂板上