文档介绍：蛋白质得检测(参考GB/T6432-94)一、原理凯氏定氮法测定试样中得含氮量,即在催化剂作用下,用浓硫酸破坏有机物,使含氮物转化为硫酸铵、加入强碱进行蒸馏使氮溢出,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6。25,计算出粗蛋白含量。二、试剂硫酸化学纯,含量为98%,无氮;,含5个结晶水,6g硫酸钾或硫酸钠,均为化学纯,磨碎混匀;氢氧化钠化学纯,40%水溶液(m/V);硼酸化学纯,2%水溶液(m/V);混合指示剂***红0。1%乙醇溶液,%乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为3个月;盐酸标准溶液基准无水碳酸钠法标定;0、1mol/l盐酸标准溶液:8、3mL盐酸注入1000mL蒸馏水中。0。02mol/l盐酸标准溶液:、蔗糖分析纯;硫酸铵分析纯,干燥;硼酸吸收液1%硼酸水溶液1000mL,加入0、1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL,%***红乙醇溶液7mL,4%氢氧化钠水溶液,混合,置阴凉处保存期为1个月(全自动程序用)、三、仪器设备实验室用样品粉碎机或研钵;分样筛孔径0、45mm(40目);分析天平感重0、0001g;消煮炉或电炉;滴定管酸式,10、25mL;凯氏烧瓶250mL;凯氏蒸馏装置常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式;锥形瓶150、250mL;容量瓶100mL;消煮管 250mL;定氮仪以凯氏原理制造得各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。四、分析步骤仲裁法试样得消煮称取试样0。5-1g(含氮量5-80mg)(精确至0、0002g),放入凯式烧瓶中,加入6、4g混合催化剂,与试样混合均匀,再加入12mL硫酸与2粒玻璃珠,将凯式烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化、泡沫消失后,再加强活力(360-410℃)直至呈透明得蓝绿色,然后再继续加热,消化全过程至少2h。氨得蒸馏常量蒸馏法将试样消煮液冷却,加入60-100mL蒸馏水,摇匀,冷却、将蒸馏装置得冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液与2滴混合指示剂得锥形瓶内。然后小心地向凯式烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液,轻轻摇动凯式烧瓶,使溶液混匀后再加热蒸馏,直至流出液体体积为100mL。降下锥形瓶,使冷凝管末端离开液面,继续蒸馏1-2min,并用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏、半微量蒸馏法将试样消煮液冷却,加入20mL蒸馏水,转入100mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,作为试样分解液、将半微量蒸馏装置得冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液与2滴混合指示剂得锥形瓶内。蒸汽发生器得水中应加入***红指示剂数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补充硫酸、准确移取试样分解液10—20mL注入蒸馏装置得反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。注:两种蒸馏法测定结果相近,可任选一种、蒸馏步骤得检验精确称取0、2g硫酸铵,代替试样,选仲裁法或推荐法“氨得蒸馏"中得步骤进行操作,测得硫酸铵含量为21。19%±%,否则应检查加碱、蒸馏与滴定各步骤就是否正确。推荐法试样得