文档介绍：BioengineeringCollegeDalianUniversity定义:利用抗体分子能与抗原分子特异性结合的特点,将游离的杂蛋白和结合于固相载体的目的蛋白分离,并利用特殊的标记物对其定性或定量分析的一种检测方法。BioengineeringCollegeDalianUniversityBioengineeringCollegeDalianUniversity采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)基本原理BioengineeringCollegeDalianUniversity基本原理?三个基本原理?抗原或抗体能物理性地吸附于固相表面,并且保持其免疫活性;?抗原或抗体能与酶通过共价键形成酶结合物,同时保持各自的免疫活性和酶活性;?酶结合物与相应的抗原或抗体结合后,能通过加入底物的颜色反应来确定免疫反应的发生,颜色反应的深浅与标本中相应抗原或抗体的量成正比。BioengineeringCollegeDalianUniversity是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗原-抗体复合物,加入酶反应底物,测定产物的吸光值。直接法:ELISA方法的分类BioengineeringCollegeDalianUniversity是当抗体(一抗)和包被在酶标板的抗原结合形成复合后,再以酶标二抗和复合物结合,加入酶反应底物,测定产物的吸光值。间接法:BioengineeringCollegeDalianUniversity是先将未标记的抗体包被在酶标板上,用于捕获抗原,再用酶标的抗体与抗原反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。夹心法:BioengineeringCollegeDalianUniversity?96孔酶标板?包被抗原(牛血清白蛋白,BSA);?封闭液(3%脱脂奶粉)?兔抗BSA抗体?酶标记羊抗兔IgG抗体(酶标记物);?底物(OPD);?抗体稀释液(PBS);?洗涤液(PBS-%Tween20);?反应终止液(2N硫酸)。::取酶标板,加入50μL/孔的抗原稀释液(5ug/孔)37℃,