文档介绍：,熟悉培养基的类型,学****并掌握培养基的原则与方法。掌握无菌操作技术,掌握病原菌的分离与培养方法。了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。学****并掌握空气及人体细菌检测学方法。,熟悉不同类型细菌的基本形态。掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。二实验器材培养基的制备:干粉培养基、天平、蒸催水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网空气与人体体表细菌学检查:琼脂培养基、酒精、碘酒细菌的分离培养:脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机细菌的纯培养:接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基细菌的形态学检测:斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、:、营养琼脂平板、接种环、药物纸片(青霉素、庆大霉素、头抱曲松\玻片、兔血浆、:玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、・培养基的制备上害养基白勺帝J备Preparat:〉14呂3OOml——,3,4,>mI3次t>mI16JLX4,中试晋,>OmI1次3mI15>XX4,小試爸"肉汤8,9,1O,13■半1固俳球刀旨Zg6Oml3次4<nI2JLX4,小試皆"称量琼脂粉一蒸丫留水-加热溶化T分装-集中放在试管筐里-罩上硫酸纸、牛皮纸-用橡皮筋扎好-放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内-送到高压蒸汽灭菌室(洗刷室)-灭菌2•,选择实验楼女厕所-将平板盖打开,盖朝下放置在平板旁边-平板暴露于空气中15分钟i平板倒扣盖上T作标记一37弋温箱培养24小时-观察结果。,乙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁分别共用1个平板按下图在普通平板上接种手指上的细第1格为洗手前,第2格为洗手后,第3格为消毒后,第4格空白对照。3•:借助于划线,将混杂的多种细,在平板表面分散成单个细/并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖,形成肉眼可见的细菌集团(-分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上,各做两份,-烧掉接种环上多余的标本-冷却后,应用分区划线分离法,将脓汁标本接种于营养琼脂平板(2份力粪便标本接种于伊红美蓝平板(2份)—接种环烧灼灭菌—将平板倒置37°C培养18〜24h-观察结果。4•细菌的纯培养甲f普通平板f金黄色菌落(auratuszgoldenyellow)—1支斜面乙-普通平板-白色菌落(albus,white)-l支斜面丙EMB平板f紫黑色菌落(atropurpureus)-*!支斜面丁->EMB平板-粉红色菌落(pink)-I支斜面斜面正面上2/3作标记:组号+金黄、白色、紫黑、粉红。5••^色力^法•步马聚TheGramStainProcedure千垛纟吿品紫一>初染1 針一►水注一►F="6xetioriCZXr\Ziol«=»t卢戈粪液一►女某染=分钟一►水洗一►o尺qr\/i一95%二醉一►贬色纟勺20秒钟一►水洗Y标祥器红一>复染=O钟f水注一►-看清标本-滴加香柏油->100x油镜-浸泡油中-模糊物象-细调节调焦z观察物像-记录结果T关闭电源T擦镜纸拭去香柏油T擦镜纸沾少许乙醇和乙醛(7:3)混合液擦拭-擦镜纸擦拭油镜。-分别在斜面培养物中挑取菌苔少许-立即移入肉汤培养基管中-在接近液面的管壁上轻轻研磨-沾取少量肉汤调和-混匀一试管口通过火焰2-3次灭菌-塞好棉塞->35°C培养4〜6小时6•细菌的生化试验、-用灭菌接种针分别刮取实验所得到的紫黑色和粉红色菌种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内一接种环烧灼灭菌-将微量管平放在平板内-37°C培养过夜后-观察结果。-分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布(如图6)接种环烧灼灭菌-标记清、头、庆T