文档介绍：选修3《现代生物科技专题》知识点总结专题1基因工程DNA重组技术的基本工具1、基因工程的概念又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗地说,就是按照人们的意愿, 把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向改造生物的遗传性状 。优点:定向地改造生物的遗传性状;实现基因在不同物种之间的转移,迅速培育出生物新品种2、 基因拼接的理论基础:(1) 大多数生物的遗传物质是 DNA(2) DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。(3) 双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。3、 外源基因在受体内表达的理论基础:(1) 基因是控制生物性状的独立遗传单位。(2) 遗传信息的传递都遵循中心法则。(3) 生物界共用一套遗传密码。(一)基因工程的基本工具1•“分子手术刀”一一限制性核酸内切酶( 限制酶)(1) 来源:主要是原核生物(2)功能:能够识别双链DNA分子的特定的核苷酸序列,有特定的切割位点(专一性)。(3) 作用部位:磷酸二酯键(3)结果:形成两种末端:黏性末端和平末端。注意:用同种限制酶分别切割目的基因和载体,从而形成相同的黏性末端,然后用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来2•“分子缝合针”一一DNA连接酶作用:恢复磷酸二酯键。种类:E・coliDNA连接酶:来源于大肠杆菌, 连接黏性末端;T4DNA连接酶:来源于噬菌体, 连接黏性末端和平末端。“分子运输车” 载体载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。具有一至多个限制酶切点,供外源DN***段插入。具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。对受体细胞无害常用的载体:细菌的质粒、入噬菌体的衍生物、动植物病毒 (天然质粒不能直接使用)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因 。方法:①从基因文库中获取目的基因(方法:根据基因的核苷酸序列、基因的功能在染色体上的位置、基因的转录产物 mRNA基因翻译产物蛋白质 等特性。)利用PCR技术扩增目的基因(适用于已知目的基因的一段核苷酸序列)通过化学方法人工合成(适用于目的基因较小,或已知目的基因核苷酸序列)基因组文库与cDNA文库的区别PCR技术扩增目的基因PCR的含义:全称多聚酶链式反应,是一项在生物体外复制特定 DN***段的核酸合成技术。目的:快速获取大量的目的基因原理:DNAM制使用的前提:已知目的基因的一段核苷酸序列条件:模板DNA、引物、热稳定DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸过程:第一步:变性,加热至90〜95CDNA解链为单链,断裂氢键;第二步:退火,冷却到55〜60C,引物与两条单链DNA结合,形成局部双链DNA第三步:延伸,加热至70〜75C,热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。特点:指数(2n)形式扩增第二步:基因表达载体的构建(核心)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥 作用。组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因启动子:位于基因的首端,是 RNA聚合酶识别和结合的部位终止子:位于基因的尾端,使转录停止。标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而 将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。注意:①载体与表达载体的区别:二者都有标记基因和复制原点两部分 DN***段。表达