文档介绍：安徽农业大学
硕士学位论文
鸡毒支原体F弱毒疫苗对肉鸡生长及免疫性能影响的研究
姓名:丁亮
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:魏建忠;李郁
2011-06
中文摘要
鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是引发鸡慢性呼吸道疾病
(chronic respiratory disease,CRD)和火鸡传染性窦炎(infectious sinusitis)的
主要病原菌。MG在国内鸡场的感染率很高,除大多数的祖代种鸡场进行疫苗免
疫外,商品蛋鸡和肉鸡场多数都只用药物来维持鸡群的健康,使MG的彻底控制
存在一定的局限性,也给养禽业造成了巨大经济损失。因此,利用MG F疫苗对
CRD进行防控具有重要的现实意义。本研究的目的主要包括:①建立一种快速、
特异的双重PCR检测方法,以区别MG F疫苗株与MG强毒株;②研究MG F疫苗
免疫对商品肉鸡和种肉鸡生产及免疫性能的影响,并探索其合理免疫程序。本研
究内容包括以下几个部分:
试验一:鸡毒支原体强毒株与 F 疫苗株双重 PCR 检测方法的建立
试验选用标准 MG F 弱毒疫苗株和国际实验室公认 MG 标准强毒 R 株,根
据 R 株的 pvpA 基因序列和 F 疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列,设计 2 对
引物 R1、R2 和 F1、F2,在单一 PCR 的基础上,建立检测 MG 强毒株和 F 疫苗
株的双重 PCR 方法。该方法特异性强,敏感度高,能同时检测的 MG R 株和 F
株的 DNA 最低含量分别为 ng 和 ng。与传统的 MG 分离鉴定方法相比,
该方法操作简便,能直接对临床样品进行检测,并区分出强、弱毒株,为 MG
阴性鸡群的建立提供了重要的技术手段。试验表明,喉、气管棉拭子为首选检测
对象,其结果具有良好的实际应用价值。
试验二:鸡毒支原体 F 疫苗对商品肉鸡生长及免疫性能的影响
试验选用200只1日龄健康三黄肉鸡,采用单因素4水平随机设计,每组50只,
分为免疫攻毒组、攻毒组、免疫组和对照组,相应为试验一组、试验二组、试验
三组和对照组。在 1日龄和16日龄对试验一组和三组进行两次F疫苗免疫,并在24
日龄时对试验一组和二组进行攻毒,统计每组鸡1-42日龄的增重和耗料量;在攻
毒后隔7天每组剖杀5只鸡,采集喉拭子、气囊拭子和喉头、肺脏、肝脏等组织,
运用双重PCR方法检测,并进行心脏采血,对血清中钙离子(SCA)、磷离子(SP)、
总胆固醇(SCHOL)、总蛋白(TP)和尿素氮(SUN)成分进行测定分析;对31
日龄和38日龄所采血液通过HA-HI试验进行NDV免疫抗体检测分析。
结果显示,免疫攻毒组所检测到的R株数比攻毒组低60%。免疫组总增重优
于其它三组,较试验一组、%、%%,差
异显著(p<),、;抗体水平也一直维持在较高
的滴度,与攻毒组之间存在显著差异性(p<),与对照组相比前期差异显著
(p<),后期无显著差异(p>),而与免疫攻毒组之间无显著性差异
I
(p>);不同时期各组血液指标值组间差异并不显著(p>)。表明免疫
MG F疫苗,能够抑制后续MG感染,改善商品肉鸡生长性能,降低MG强毒对NDV
疫苗的影响,增强免疫效果,并且不影响体内的代谢平衡,有利于提高养殖效益。
试验三:鸡毒支原体 F 疫苗对种肉鸡生长及免疫性能的影响
试验选用3000只1日龄健康的三黄种肉鸡,采用单因素2水平设计,每组1500
只,分为免疫组和对照组,相应为试验一组和试验二组。1日龄时对试验一组进
行MG F疫苗免疫,并于5日龄、30日龄和40日龄时采集两组鸡喉棉拭子样品,运
用PCR方法进行检测;分别统计0-22日龄、22-32日龄、32-40日龄和0-40日龄期
间各组鸡的增重、耗料量和死淘率;在31日龄、38日龄进行采血,通过HA-HI
试验进行NDV和AIV(H9)免疫抗体检测分析。
结果显示,免疫组检测到的野毒株的量低于对照组;整个试验期总增重较对
%,,差异显著(P<),而且在不同阶段也都存
在显著性差异(P<);两种免疫抗体水平比对照组都高,差异显著(p<)。
表明免疫MG F疫苗,能够抑制后续MG的感染,改善种肉鸡生长性能,降低MG
强毒对NDV和AIV疫苗的影响,增强免疫效果,提高养殖经济效益。
关键词:鸡毒支原体,双重PCR,F疫苗,生产性能,免疫性能