文档介绍：中山大学硕一l:论文干扰eiF4E基冈对三阴乳腺癌细胞生物学行为与化疗敏感性的影响干扰eIF4E基因对三阴乳腺癌细胞生物学行为与化疗敏感性的影响专业:肿瘤学硕士生:周菲菲导师:夏良平副教授中文摘要背景与目的:三阴乳腺癌是一种特殊类型的乳腺癌,与非三阴乳腺癌相比预后差,对内分泌治疗反应不佳,临床无有效靶向治疗药物。目前针对三阴乳腺癌的靶向药物临床研究较少,疗效及安全性尚不确定,因此,寻找新的靶点,开发新的更为安全有效的分子靶点药物,将为治疗三阴乳腺癌带来光明的前景。真核起始因子4E(eiF4E)是真核细胞翻译起始因子,在蛋白质的翻译起始阶段起重要作用,并且与多种恶性肿瘤的发生、发展、浸润密切相关。已有研究表明elF4E在乳腺癌包括三阴乳腺癌中高表达,与其预后有显著相关性,并与乳腺癌的化疗或放疗的敏感性显著相关,从而可能成为乳腺癌靶向治疗的新靶点。目前,elF4E基因对三阴乳腺癌细胞生物行为影响的研究尚缺乏,本研究旨在阐明下调elF4E基因表达后三阴乳腺癌细胞生物学行为的改变,包括细胞周期的影响、细胞侵袭迁移的影响、化疗药物敏感性的影响及可能机制等,为其作为三阴乳腺癌治疗的新靶点提供理论基础。方法:构建稳定表达shRNA— 细胞(三阴乳腺癌细胞),通过Western blotting法检测elF4E蛋白表达,评价干扰效率,选择最有效的干扰转染细胞株进行试验。克隆形成实验、 l细胞增殖能力、侵袭转移能力变化;流式细胞术观察细胞周期变化;MTT法观察干扰前后细胞对化疗药物(顺铂、阿霉素、紫杉醇、多西他赛)敏感性变化;Western 、、p53和p2l蛋白表达的变化。 :,瞬时转染siRNA_eIF4E三阴乳腺癌MDA— -435细胞,两种方法均可明显抑制上述细胞中elF4E蛋白的表达;克隆形成实验及流式细胞术表明: l细胞阻滞在G1期,细胞处于增生不活跃状态,明显抑制细胞增殖;Transwell实验显示:;MTT法表明:降低elF4E表达可增强包括顺铂、紫杉醇、阿霉素、 细胞的敏感性:Western blotting法显示:-23l细胞中elF4E表达诱导p53和p21的表达上调,同时明显增加促凋亡蛋白Bax蛋白表达,而显著减少抗凋亡蛋白Bcl一2蛋白表达,即凋亡相关蛋白Bax/。结论: l、成功构建elF4E靶向shRNA表达质粒,应用此质粒转染三阴乳腺癌 ; -435细胞;两种方法均有效抑制elF4E基因蛋自水平表达,为后续的研究提供了有力的工具。 2、干扰elF4E基因表达使三阴乳腺癌细胞阻滞在Gl期,细胞处于增生不活跃状态,可显著地抑制细胞增殖和细胞侵袭转移能力。 3、干扰elF4E基因表达可增强包括顺铂、紫杉醇、阿霉素、多西他赛等化疗药物对三阴乳腺癌细胞的敏感性,其机制可能是诱导p53和p21的表达、调节凋亡相关蛋白Bax/Bcl一2而实现的。关键词:三阴乳腺癌;elF4E; l细胞株;化疗敏感性 H 中山大学硕l:论文干扰elF4E基冈对三阴乳腺癌细胞生物学行为与化疗敏感性的影响 Knockdown of elF4E suppresses cellgrowth and migration, enhances chemosensitivity correlates with inCrease 0l ●●■ Bax/Bcl-·2ratio intriple·-negative breast cancer cells Major:Oncology Master Candidate: Zhou Supervisor:-Ping Xia ABSTRACT Background&0bjective:Triple-negative breastcancer(TNBC)is aspecial type ofbreastcancel which appears toberefractory toendocr