文档介绍：:指生物技术在植物上的应用,包括植物组织培养技术、人工种子、细胞工程、基因工程等多个生物技术,主要是指植物基因工程和与之相关的植物组织细胞培养技术、分子标记育种技术等。:现代生物技术是以20世纪70年代DNA重组技术的建立为标志的。:植物生物技术被普遍认为是未来人类解决资源短缺不可或缺的技术,也是争取农产品高附加值的重要技术手段。::洗涤室(准备室)、配置室、灭菌室、接种室、培养室、观察室等。:镊子类、剪刀类、组培瓶、各类器皿、量筒、移液管、试剂瓶、容量瓶、试管以及移液管架、酒精、玻璃棒、:无机营养成分、有机营养成分、碳源、激素、琼脂、水。其中无机营养包括大量元素、微量元素。有机营养包括氨基酸和维生素。碳源有蔗糖、葡萄糖、果糖,以蔗糖为主。:生长素:吲哚乙酸、NAA、2,4-D;细胞分裂素:控制植物细胞分化(比例高时——产生芽,比例低时——产生根)、赤霉素、脱落酸作用:促进细胞生长和细胞分裂;?诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力;?形成愈伤组织,促进生根;?与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱导。,培养基分为:初代培养基:用来第一次接种外植体的培养基;继代培养基:用来接种继初代培养物的培养基。根据其作用不同,培养基分为:诱导培养基;增殖培养基;生根培养基。:主要有MS、White、N6、B5、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。:基本培养基的基础上,根据试验的不同需要,附加一些物质,如生长调节物质和其他复杂有机物质等。:计量、移液、取琼脂蔗糖备用、融化、混合、调pH、分装、包扎、:预防感染杂菌的需要;消除生物污染的需要;:a、物理方法:干热、湿热、过滤()紫外灯、超声波等。b、化学方法:使用灭菌剂或抗菌素,如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等。:适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法:150℃、40min或120℃、120min,如果发现芽孢杆菌,160℃、90~120min。:适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃维持20~30min。注意点:加足水、排尽气、气压降到0时,:培养基的灭菌一般用高压高温处理,但如果培养基中某些成分遇到高温分解(如某些生长调节剂GA3、玉米素等),就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌。灭菌方法:将生长调节剂或酶配成一定浓度,用注射器注入微孔滤膜虑,~。制培养基时,现将培养基高压灭菌,待降至50℃左右时,加入适量的激素,然后分装。:主要是利用紫外灯进行照射,适合实验室空气、操作台等,灭菌时间20~30min。:用火焰灼烧达到灭菌目的,适用于接种器皿的灭菌。(%)消毒时间(min.)效果残液去除难易乙醇70--~12~15最好最难过氧化氢10~125~15较好最易-130~60较好较难抗菌素4~50mgl次氯酸钙/纳9~105~%的酒精擦拭超净工作台,然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意:台面上的用品不要放置太多或重叠放置,以免降低灭菌效果。关紫外灯、打开风机,过5-10min进入缓冲间,以75%洗手和手臂,更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。(注:没有特别情况,尽量不要下工作台):取流水冲洗(至少30min)过的外植体,用一定的消毒剂浸泡消毒,用无菌水冲洗3~4次,放入无菌培养皿中,置于酒精灯火焰下方,用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。打开培养瓶,瓶口在灯焰处旋转灼烧,用镊子将培养材料置于培养基上,灼烧镊子放回,灼烧瓶口,盖上瓶塞。用酒精擦洗工作台和手。进行下一轮操作。(1)进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染机会。(2)不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。(3)为拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在右侧,左手用品在左侧,酒精