文档介绍：RP-HPLC 法测定氢溴酸西酞普兰原料含量及有关物质魏君谢剑炜军事医学科学院毒物药物研究所北京 100850 氢溴酸西酞普兰( Citalopram Hydrobromide ) 是一种新型抗抑郁药, 该药是一种高选择性的 5- 羟色胺回摄抑制剂, 1989 年在丹麦首次批准上市, 1998 年美国 FDA 批准在美国上市, 1999 年获准在中国市场销售,为能严格控制本品纯度,本文建立了高效液相色谱法检查原料药中有关物质和含量,结果表明方法准确、简便,可有效的用于本品的质量控制。 1 仪器与试药美国惠普 HP1100 型二元梯度泵高效液相色谱仪,附 Chemstation 化学工作站。氢溴酸西酞普兰及中间体( Ⅰ) 5- 氰基- 苯酞、中间体( Ⅱ) 4-( 4`- 氟- 苯甲酰基) -3- 羟甲基- 苯氰、中间体(Ⅳ) 4-[4- ( 二甲胺基) -1- ( 4`- 苯基) -1- 羟丁基]-3- 羟甲基- 苯氰以及反应物 4- 溴- 氟苯均为本所合成,氢溴酸西酞普兰对照品经归一化法测定纯度大于 % ,甲醇为色谱纯,水为双蒸水,其他化学试剂均为分析纯。 2 方法和结果 色谱条件色谱柱为 Zorbax SB-C18 250 × mm,5μm, 流动相: 甲醇∶ 醋酸铵=60 ∶ 40 ( mol/L 醋酸铵液加三乙胺 % ,用磷酸调 pH至 ) ,紫外检测波长: 240 nm ,流速: 1 .0ml/min ,进样量 20μl ,柱温 25℃,按氢溴酸西酞普兰计算理论塔板数为 8865 。 标准曲线的制备精称氢溴酸西酞普兰 50 mg ,溶于 100 ml 流动相中,得到 mg/ml 的氢溴酸西酞普兰标准液, 分别精密量取 1,3,5,7,9 不同体积的标准液于 25 ml 量瓶中, 稀释至刻度并摇匀, 然后注射 20μl 进入 HPLC 进行分析。以浓度(μ g/ml ) 为横坐标, 峰面积积分值为纵坐标,绘制工作曲线,线性范围在 ~ 500 μ g/ml 呈良好线性关系,回归方程为: Y= + (r=) 。 样品与中间体的分离度据合成路线, 氢溴酸西酞普兰可能引入的杂质主要有中间体(Ⅰ) 5- 氰基- 苯酞、中间体(Ⅱ) 4-( 4`- 氟- 苯甲酰基) -3- 羟甲基- 苯氰、中间体(Ⅳ) 4-[4- ( 二甲胺基) -1- ( 4`- 苯基) -1- 羟丁基]-3- 羟甲基- 苯氰以及反应物 4-溴- 氟苯, 取氢溴酸西酞普兰以及各中间体以流动相配制成一定浓度的混合溶液, 进样分析, 结果氢溴酸西酞普兰与各中间体的分离度均大于 ,结果见图 1。图1 本品及各中间体 HPLC 分离图 最低检测限将氢溴酸西酞普兰及中间体( Ⅰ) 5- 氰基- 苯酞、中间体( Ⅱ) 4-( 4`- 氟- 苯甲酰基) -3- 羟甲基- 苯氰、中间体( Ⅳ) 4-[4- (二甲胺基) -1- ( 4`- 苯基) -1- 羟丁基]-3- 羟甲基- 苯氰以及反应物 4-溴- 氟苯的流动相溶液稀释进样, 以基线噪音比为 3 作为检测限, 经测定在选定的色谱条件下,氢溴酸西酞普兰检测限为 1ng ,其它中间体均为 ng ,