文档介绍：绪论植物生物技术的概述:指生物技术在植物上的应用,包括植物组织培养技术、人工种子、细胞工程、基因工程等多个生物技术,主要是指植物基因工程和与之相关的植物组织细胞培养技术、分子标记育种技术等。生物技术的产生和发展:现代生物技术是以20世纪70年代DNA重组技术的建立为标志的。发展迅速植物生物技术的展望:植物生物技术被普遍认为是未来人类解决资源短缺不可或缺的技术,也是争取农产品高附加值的重要技术手段。WhatisBiotechnology什么是生物技术:应用该技术通过添加来自另一生物的基因来修饰生物的生物功能第一章 组织培养实验室建设与操作技术标准的组织培养实验室包括:洗涤室(准备室)、配置室、灭菌室、接种室、培养室、观察室等。组织培养所用到的器具:镊子类、剪刀类、组培瓶、各类器皿、量筒、移液管、试剂瓶、容量瓶、试管以及移液管架、酒精、玻璃棒、3.培养基的配制:无机营养成分、有机营养成分、碳源、激素、琼脂、水。其中无机营养包括大量元素、微量元素。有机营养包括氨基酸和维生素。碳源有蔗糖、葡萄糖、果糖,以蔗糖为主。激素包括生长素和细胞激动素植物生长调节物质:生长素:吲哚乙酸、NAA、2,4-D;细胞分裂素:控制植物细胞分化(比例高时——产生芽,比例低时——产生根)、赤霉素、脱落酸作用:促进细胞生长和细胞分裂;诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力;形成愈伤组织,促进生根;与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱导。根据培养物的培养过程,培养基分为:初代培养基:用来第一次接种外植体的培养基;继代培养基:用来接种继初代培养物的培养基。根据其作用不同,培养基分为:诱导培养基;增殖培养基;生根培养基。基本培养基:主要有MS、White、N6、B5、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。完全培养基:基本培养基的基础上,根据试验的不同需要,附加一些物质,如生长调节物质和其他复杂有机物质等。8. 培养基的配制:计量、移液、取琼脂蔗糖备用、融化、混合、调 pH、分装、包扎、培养基的灭菌灭菌工作的重要性:预防感染杂菌的需要;消除生物污染的需要;防腐与保存的需要灭菌的方法:a、物理方法:干热、湿热、过滤()紫外灯、超声波等。b、化学方法:使用灭菌剂或抗菌素,如酒精、次***酸钠、升***、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等。:适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法:150℃、40min或120℃、120min,如果发现芽孢杆菌,160℃、90~120min。:适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃维持20~30min。注意点:加足水、排尽气、气压降到0时,才能开盖过滤灭菌:培养基的灭菌一般用高压高温处理,但如果培养基中某些成分遇到高温分解(如某些生长调节剂GA3、玉米素等),就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌。灭菌方法:将生长调节剂或酶配成一定浓度,用注射器注入微孔滤膜虑,~。制培养基时,现将培养基高压灭菌,待降至50℃左右时,加入适量的激素,然后分装。:主要是利用紫外灯进行照射,适合实验室空气、操作台等,灭菌时间 20~30min。火焰灼烧灭菌:用火焰灼烧达到灭菌目的,适用于接种器皿的灭菌。消毒剂消毒剂使用浓度(%)消毒时间(min.)效果残液去除难易乙醇70--3好易***化***~12~15最好最难过氧化氢10~125~15较好最易抗菌素4~50mgl-130~60较好较难次***酸钙/纳9~105~30好易无菌操作技术实验器具和材料的准备75%的酒精擦拭超净工作台,然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意:台面上的用品不要放置太多或重叠放置,以免降低灭菌效果。关紫外灯、打开风机,过 5-10min进入缓冲间,以75%洗手和手臂,更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。(注:没有特别情况,尽量不要下工作台)外植体和外质体的灭菌:取流水冲洗(至少 30min)过的外植体,用一定的消毒剂浸泡消毒,用无菌水冲洗 3~4次,放入无菌培养皿中,置于酒精灯火焰下方,用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。打开培养瓶,瓶口在灯焰处旋转灼烧,用镊子将培养材料置于培养基上,灼烧镊子放回,灼烧瓶口,盖上瓶塞。用酒精擦洗工作台和手。进行下一轮操作。无菌操作的注意事项1)进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染机会。2)不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。3)为拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在右侧,左手用品在左侧,酒精灯置于中央。4)工作由始至终要保持一定顺序性,组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气