文档介绍：高通量筛选技术的应用1精选课件高通量筛选(HTS)又称大规模集群式筛选,是由高容量化合物库、自动化操作、高灵敏度检测、高特异筛选模型、高效率数据处理5个子系统有机组合而成,是一种新型、高自动化、高灵敏度、高通量的筛选技术。其理论基础是反向药理学(reversepharmacology),即基于受体、酶及离子通道等分子、细胞水平药物作用靶点,从现有化合物库中筛选出具有生物活性的先导化合物,在此基础上再进行组织、器官及疾病相关动物模型研究2精选课件TEXT高通量筛选技术在医药领域的应用TEXT高通量筛选技术在酶工程领域的应用TEXT高通量筛选技术在基因领域的应用3精选课件高通量筛选(high-throughoutscreening)是近年来迅速发展起来的药物筛选技术,它通过运用基 因科学、蛋白质科学、分子药理学、细胞药理学、微电子技术等多学科理论和技术,以及与疾病相关的酶和受体为作用靶点,对天然或合成化合物进行活性测试,并在此基础上进行筛选。高通量筛选具有快速、高效、经济、高特异性等优点,其中所用的样品量甚少的特点尤其适用于天然化合物的活性筛选高通量筛选技术在医药领域的应用4精选课件药物高通量筛选技术分类(筛选平台):分子平台、细胞平台、酵母平台、动物平台动物平台。前两种平台都是体外模型,有些药物在体外模型中虽然能够显示良好活性,但是进入动物体内检测的时候活性却大大降低,甚至没有活性。主要原因是由于在动物体或人体中,药物作用的发挥不仅需要药理活性,还与它的分布、吸收、代谢、排泄有关。有些体外活性良好的药物,由于脂水分配系数问题,导致机体不能吸收,或是不能正确分布到作用靶位点,所以体内活性大幅度降低。动物平台是近几年发展起来的新技术,在一些疾病的研究上已经显现了重要作用,但仍旧需要不断完善。高通量筛选技术在医药领域的应用5精选课件由于天然药物中成分复杂性及多种成分间可能存在的协同作用,因此有效成分的分析、鉴定和筛选是天然药物开发中的一个难题。同时,许多天然药物临床资料相对不足,仍需要进行必要的再认识和验证。面对海量的天然药物,高通量筛选技术特有微量、快速、灵敏和准确等特点。高通量筛选技术在医药领域的应用6精选课件特点:理性设计和定向进化现阶段人们还没有完全掌握对酶的空间构象预测、结构分析等技术,所以试图通过理性设计达到改善酶特性的目的仍然很难实现,因此,通过非理性设计特别是定向进化技术来改造酶特性的策略依然是人们关注的焦点。 酶的定向进化包括两个重要的步骤,首先是变异体库的建立, 其次是对最适突变体的筛选与鉴定高通量筛选技术在酶工程领域的应用7精选课件高通量筛选技术在酶工程领域的应用筛选方法分类:8精选课件分光光度测量法和荧光检测法:Reymond与其同事利用伞形酮建立了一种巧妙的高通量筛选方法优点在于底物能在比较高的温度或者比较宽的pH范围内保持稳定,并且可以通过构 建不同的底物来检测不同的酶。高通量筛选技术在酶工程领域的应用9精选课件酸检测法:是一种经常应用于脂肪酶或者酯酶的高通量筛选方法,主要包括pH指示剂法、乙酸法以及最近出现的荧光钠盐法。荧光钠盐(uoresceinsodiumsalt)是一种具有绿色荧光的有机盐,当用该盐作为酶促反应的指示剂时,随着反应体系中酸的增加,该盐的荧光会逐渐被H+离子所淬灭,因此,通过检测其在495nm处吸光值的变化我们便可以检测出酶促反应的速率高通量筛选技术在酶工程领域的应用该方法不仅灵敏,而且经济实用,除了可以检测脂肪酶以及酯酶的酶活和对映选择性外,还可以用来筛选其他催化水解反应的酶类,如蛋白水解酶、脱酰胺酶等。H+10精选课件