文档介绍：肝糖原的提取、鉴定与定量一、实验目的 ,了解其注意事项。 2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽***比色测定糖原含量的原理和注意事项, 掌握其操作方法。。 (视具体情况,采用合适的混匀方法)。。。二、实验原理(一)肝糖原的提取、鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三***醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用 95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。 CuSO 4十 2NaOH ═ Na 2 SO 4 +Cu(OH) 2↓ 2Cu(OH) 2十 C 6 H1 2O 6═ 2CuOH 十氧化型葡萄糖+H 2O 2CuOH ═ Cu 2O↓(红色)+H 2O Cu(OH) 2═ CuO ↓(黑色)+H 2O (二)肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟***呋喃甲醛, 此化合物再与蒽***脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在 620n m 处有最大吸收。糖含量在 10-100 μg 范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法(直接比较法) 即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先置于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。三、材料与方法: 以流程图示意实验材料: (一)仪器 ,室温?100 ℃恒温水浴箱( ×2),分光光度计,精度为 10mg 级电子天平( ×1) ( ×1),镊子( ×1),研钵( ×1) ( ×1),(100 ×15) mm 试管( ×3) ( 2mL ×1,5 mL ×2),1000 μL微量可调取液器( ×1) 5. 100mL 容量瓶( ×1) ( ×1) (二)实验样品和试剂。 %乙醇。 3. (5 %) 三***醋酸溶液。 4. NaCl 溶液。 5. 12mol/L HCl 。 6. (50 % )NaOH 。。。 9. (30 % )KOH 溶液。 11. 标准葡萄糖液(50mg/L) 。 12. 17mol/L(90 % )H 2 SO 4(用于制备蒽***显色剂)。 13. 蒽***显色剂:称取蒽*** ,用 17mol/L H 2 SO 4溶解至 100 mL 。此试剂不稳定,以当日配制为宜,冰箱保存可用 4-5d。实验方法: 吸取1m L量溶液时使用可调微量取液器,吸取1m L以上量溶液时使用刻度吸量管。(一) 肝糖原的提取与鉴定操作流程如下:鸡肝约 ,剪碎+ l 3 COOH 1 ml 研磨至乳状+ l 3 CO