文档介绍：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期 2014-12-25 实验地点第 1 实验室合作者姜晨煜指导老师周珏宇评分教师签名批改日期 20 一、实验目的 1. 掌握组织样品的制备方法,了解其注意事项。 2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽***比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。 3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。 4. 熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况,采用合适的混匀方法)。 5. 正确掌握溶液转移的操作。 6. 正确操作使用分光光度计。二、实验原理 1. 实验一原理: (1)肝和肌肉组织中糖原的含量最高,因此适于作糖原的提取与鉴定。(2) 用三***乙酸破坏肝组织的酶且沉淀蛋白而保留糖原。糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用 95% 乙醇将滤液中的糖原沉淀,再溶于热水。(3) 糖原溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色,本身无还原性,在酸性溶液中加热可水解为具有还原性的葡萄糖。后者可将碱性铜溶液(班氏试剂, Benedict reagent )中的二价铜氧化成氧化亚铜。利用上述性质,可判定组织中糖原的存在。 2. 实验二原理: 糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—— 5-羟***呋喃甲醛,此化合物再与蒽***脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在 620n m 处有最大吸收。糖含量在(10 ?100) ?g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法(直接比较法) 即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先置于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。三、材料与方法: 以流程图示意(一)实验材料 1. 实验器材( 1)普通离心机,室温?100 ℃恒温水浴箱( ×1), 722 型分光光度计,托盘天平( ×1) ( 2)剪刀( ×1),镊子( ×1),研钵( ×1) ( 3)试管架( ×1), 10mL 离心管( ×2),( 100 ×15) mm 试管( ×6) ( 4)刻度吸量管( 2mL ×1, 5 mL ×2), 1000 μL微量可调取液器( ×1) ( 5) 100mL 容量瓶( ×1) ( 6)白瓷反应板( ×1) 2. 试剂与样品(1)鸡肝。(2)95%乙醇。(3) (5 %) 三***醋酸溶液:称取未潮解的三***醋酸( C 2 HCl 3O 2, ) 5g,加蒸馏水溶解至 100 mL 。( 4) NaCl 溶液:称取 NaCl 加蒸馏水溶解至 1000 mL 。( 5) 12mol/L HCl :浓 HCl 原液( 36% ?38% )。( 6) (50 % )NaOH :称取 NaOH 50g ,用蒸馏水溶解至 100mL 。( 7)碘试剂:碘 l00mg 和 K1 200mg 溶于 50mL 蒸馏水中。( 8)班氏试剂: 称取柠檬酸钠( C 5H 5 Na 3O 7· 5H 2O, ) 和无水碳酸钠( Na 2 C0 3, ) 100g 溶于蒸馏水 700mL 中,加热促溶。冷却,慢慢倾人 %硫酸铜( CuSO 4· 5H 2O, ) l00mL ,边加