文档介绍：实验 1 总氮量的测定微量凯氏( Mirco-Kjeldahl )定氮法一、目的 1 、学****微量凯氏定氮法的原理 2 、掌握微量凯氏定氮法的操作技术,包括标准硫酸铵含量的测定,未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。二、原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氮基酸等)的含氮量。天然的含氮有机物与浓硫酸共热时,其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则变成氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。但是,这个反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点, 并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。甘氨酸的消化过程可表示如下: NH 2 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氮,借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量,一定浓度的硼酸溶液中, 硼酸吸收氨后, 氨与溶液中的氢离子结合, 生成铵离子, 使溶液中氢离子浓度降低。然后用标准无机酸滴定, 直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止, 最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。 OH NH SO Na NaOH SO NH 4424222)4(??????3 24 NH OH OH NH 324333 BO H NH BO H NH ?? 334324 BO H CL NH HCL BO H NH???滴定时用甲烯蓝和***红混合指示剂,其指示范围为 p H5 . 2~5 .6 ,将 NH 4H 2 BO 3 的蓝色滴至原来 H 3 BO 3 的蓝紫色即为终点。本法适用范围 ~ 毫克氮。相对误差应小于 2% 。三、材料、试剂与器具(一)材料人的血清或猪的血清(二)试剂 1 、浓硫酸(化学吨) 2、 30% 氢氧化钠(分析纯)溶液???????? 32224224323 NH OH SO CO SO H COOH CH 424423)(2 SO NH SO H NH ?? 3、 % N aCl 溶液 4、硫酸钾—硫酸铜混合物: 硫酸钾与硫酸铜(C uSO 4、 5H 2O)以3:1( W/W ) 的配比混合研磨成粉末。 5、 2% 硼酸 6 、混合指示剂的配制: 方法一:取 50 毫升 0. 1% 甲烯蓝无水醇溶液与 200 毫升 0. 1% ***红无水乙醇溶液混合配成,贮于棕色瓶备用,这种指示剂酸性时为紫色,碱性时为绿色,变色范围窄且灵敏。方法二: % 溴甲酚绿乙醇溶液 10 毫升与 % ***红乙醇溶液 2 毫升混和即成。本指示剂的变色范围为 ? ?紫红色灰色绿色 7. M HC l 8. 硼酸一指示剂混合液:取 100 毫升 2% 硼酸溶液, 滴加混合指示剂贮备液, 摇匀后溶液呈现紫红色即可。(约加 1 毫升左右混合指示剂) 9. 标准硫酸铵溶液( 毫克氮/ 毫升) (三) 、器具 1、凯氏烧瓶 2、消化架 3、吸量管( 1 毫升、 2 毫升) 4、量筒( 10 毫升) 5、凯氏定氮蒸馏装置 6、微量滴定管( 3 毫升、 5 毫升,可读至 毫升) 7、锥形瓶( 50~100 毫升) 8、容量瓶( 50 毫升) 四、操作步骤(一)样品的处理血清样品: 取人血( 或猪血), 放于离心管中, 于冰箱中放置过液, 次日离心除去凝血块, 上层黄色透明清液