文档介绍：重庆医学年月第卷第期
· 论著·
几种肿瘤特异性启动子在人肝癌细胞系中的活性比较
况舸,唐霓,陶鹏。,吴莹,张君。,黄爱龙△
重庆医科大学:.药学院药理教研室;.教育部感染性疾病分子生物学重点实验室,
病毒性肝炎研究所;.附属第二医院感染科
摘要:目的克隆甲胎蛋白、、人端粒酶逆转录酶基因启动子,检测并评价其在不同肝癌细
胞系和正常组织细胞中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法:采用法扩增获得、、基因的
启动子片段,将之克隆到表达虫荧光素酶基因的报告质粒上,检测、、基因启动子在肝癌细胞系和正常组织中的
转录活性,评价其转录活性水平和肿瘤特异性。结果成功克隆了、、启动子,证实、、启动子
在肝癌细胞中具有肿瘤特异性转录活性, 启动子活性最高,其活性水平为启动子的~ 倍; 启动子次之,其
活性水平为启动子的~倍;启动子活性最低。结论和启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活
性和显著的肿瘤特异性,可望开发成为新型的肝癌靶向性基因治疗工具。
关键词:启动子;人端粒酶逆转录酶;;基因疗法;肝癌;靶向
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中图分类号:.;—文献标识码: 文章编号:———

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原发性肝癌是一种常见的恶性肿瘤,适于手术切除的病例存在转录活性低、阳性率低的弱点。因此,肝癌的靶向性基因
很少,常规的手术、化疗、放疗疗效较差。肝癌基因治疗是研究治疗需要寻找更加广谱、有效的启动子来调控目的基因的
的热点,多种基因治疗手段已经被证实具有良好的肿瘤杀伤作表达。
用,但由于目前采用的基因治疗载体缺乏肿瘤靶向性,因此限端粒酶的激活是细胞发生永生化及癌变过程中极为重要
制了基因治疗方法的临床应用。的步骤。人端粒酶逆转录酶—
利用肿瘤特异性启动子调控治疗基因表达是解决基因治,仅在端粒酶阳性的肿瘤细胞和永生化细胞
疗靶向性的方法之一,目前研究最多的是甲胎蛋白启动中表达,是端粒酶的催化亚基,决定了端粒酶的活性口。在所
子在肝癌的基因治疗中的应用。多项研究已经证实基因有肝细胞癌,中均有表
的调控区能够在肝癌细胞内特异性激活外源基因的转录,并在达,其中为强表达【。基因上游调控区具有强启
肝癌的靶向性基因治疗中取得一定疗效¨。”。但启动子动子活性,且仅表现于端粒酶阳性的永生化及癌细胞系,提示
基金项目:资助项目。通讯作者,电话:,;—: ...。
重庆医学年月第卷第期
基因启动子具有肿瘤特异性的转录活性。,加入酶。℃,;℃,;℃,。
是一类仅在肿瘤细胞中表达的凋亡抑制因个循环后,℃延伸。产物为。启
子,,在终末分化的成人组织不表动子扩增条件为: ℃,,加入酶。℃,;
达嘲。在种常见的肝癌细胞株中均有表达, ℃,;℃,。个循环后,℃延伸。产
蛋白在肝癌中呈强阳性,其表达在肝癌组织与癌旁物为。启动子扩增条件为:℃,,加入
肝组织间存在显著性差异『。因此,启动子被认为是一酶。℃,;.℃,;℃,。个循环后,℃
种肝癌特异性的启动子,能