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微生物药物与生物技术
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氧化葡萄糖酸杆菌启动子的筛选及鉴定
肖苏珂,杨雪鹏,魏东芝,林金萍
.华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海:.郑州轻工业大学食品与生物工程学院,河南郑州
摘要:利用缺乏启动子的绿色荧光蛋白作为报告基因,,构建了可在氧化葡
萄糖酸杆菌中稳定存在的探针质粒一。利用构建的启动子探针质粒从氧化葡萄糖酸杆菌中分离到多个具
有启动子功能的片段——、、和,序列测定结果显示片段上具有典型的细菌启动子保守序列一
和一区和核糖体结合位点,将其命名为启动子。鉴定在氧化葡萄糖酸杆菌中的启动活性,结果显
示该启动子能有效启动异源基因绿色荧光蛋白以及脱氢酶基因的表达。
关键词:氧化葡萄糖酸杆菌;随机启动子库;启动子探针质粒;特征序列与功能
中图分类号: 文献标志码: 文章编号:———

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氧化葡萄糖酸杆菌是行遗传标记和改良,是研究和阐明其在生物催化中
一种严格好氧的革兰阴性菌⋯,与其它微生物的不的作用、并进一步将其改造为基因工程菌的重要手
同之处在于其不完全氧化糖、醇的能力,工业应用段与有效途径。但是,目前适用于氧化葡萄糖酸杆
广泛。通过现代生物技术对氧化葡萄糖酸杆菌进菌分子生物学操作的工具有限,对氧化葡萄糖酸杆
菌启动子及基因调控方面的报道较少。
收稿日期: 启动子是链上指导聚合酶结合
基金项目:国家自然科学基金项目批准号/请代码:/
,生物反应器国家重点实验室重点项目并起始合成的序列,是控制基因表
作者简介: 肖苏珂一,女,硕士研究生,专业方向:分子生达的重要部位。细菌基因的启动子结构一般为
物学。
通信联系人:林金萍一,女,助理研究员,从事生物转化与一和一,两个保守区之
酶工程相关研究。间的距离约,。一般检测启动子的方法是利
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:.. 用缺乏启动子的报告基因构建探针质粒,根据报告
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基因的表达来判断启动子的活性。由于绿色荧光仪器与试药
蛋白独具的优良特性,本研究采用缺乏启动子的绿. 仪器与试剂
色荧光蛋白作为报告基因引,与广宿主型质限制性内切酶、大肠杆菌碱性磷酸单酯酶、
,构建了在氧化葡萄糖酸杆连接酶、聚合酶公司:产
菌中可以稳定存在的启动子探针质粒。物回收试剂盒上海捷瑞生物工程有限公司;质粒小量快
基于探针质粒建立氧化葡萄糖酸杆菌随机启动速提取试剂盒道普生物技术北京有限公司;细菌基
子库,通过检测绿色荧光蛋白的荧光强度对启动子因组提取试剂盒天根生物技术北京有限公司;
进行高通量筛选,得到了一系列具有启动子活性的其它常规试剂采用进口分装或国产分析纯。
片段,对其中活性较强的片段进行测序与分析,发引物的合成及测序由上海桑尼生物技术有限
现其具有较为典型的启动子保守区域,利用荧光显公司完成。
微镜进一步检测到绿色荧光蛋白基因在氧化葡萄糖序与数据进行比对,并使用等
酸杆菌中的表达,并将其应用于