文档介绍：高效液相色谱法高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱,对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品,由流动相带入柱内,各组分在柱内被分离,并依次进入检测器,由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。1、对仪器的一般要求和色谱条件所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定。色谱柱反相色谱系统使用非极性填充剂,常用的色谱柱填充剂为化学键和硅胶,以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用,辛基硅烷键和硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如***基键合硅烷和氨基键合硅烷等)也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂,常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂;分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂;对映异构体的分离通常使用手型填充剂。填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合集团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等)以及色谱柱的填充,直接影响供试品的保留行为和分离效果。分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm(1nm=10Å)一下的填料,分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。除另有规定外,普通分析柱的填充剂粒径一般在3-10um之间,粒径更小(约2um)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。使用微径柱时,输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配;如有必要,如有需要色谱条件也需做适当调整。当对其测定结果产生争议时,应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃,为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度,但不宜超过60℃.流动相的pH应控制在2-8之间。当pH值大于8时,可使载体硅胶溶解;当pH值小于2时,与硅胶相连的化学键和相易水解脱落。当色谱系统中使用pH值大于8的流动相时,应选用耐碱的填充剂,如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶基键合填充剂等;当需使用pH值小于2的流动相时,应选用耐酸的填充剂,如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂、有机-无机杂化填充剂等。检测器最常用的检测器为紫外检测器,包括二极管阵列检测器,其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散色检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质朴检测器等。紫外、荧光、电化学检测器为选择性检测器,其响应值不仅与供试品溶液的浓度有关,还与化合物的结构有关;蒸发光散色检测器和示差折光检测器为通用型检测器,对所有的的化合物均有响应;蒸发光散色检测器对结构类似的化合物,其响应值几乎仅与供试品的质量有关;二极管阵列检测器可以同时记录供试品的吸收光谱,故可用于供试品的光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与供试品溶液的浓度在一定范围内呈线性关系,但蒸发光散色检测器的响应值与供试品溶液的浓度通常呈指数关系,故进行计算时,一般需经对数转换。不同的检测器,对流动相的要求不用。如采用紫外检测器,所用流动相应符合紫外-可见分光光度法项下对溶剂的要求;采用低波长检测时,还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长,并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散色检测器和质谱检测器通常不允许使用含不会发性盐组分的流动相。流动相反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统(采