文档介绍：液相色谱实用技术液相色谱实用技术液相色谱实用技术液相色谱实用技术( 一一一一) HPLC 定量原理及方法液相色谱定量分析的基本原理液相色谱定量分析的基本原理液相色谱定量分析的基本原理液相色谱定量分析的基本原理?在定性的基础上定量, 需有纯物质作为标准物?液相色谱定量是相对定量的方法: 即由已知量的纯被测物标样推算混合物中被测物的量?液相色谱法定量的依据是: ?被测组分的量与响应值( 峰高或峰面积) 成正比?由已知量的标样可求得定量校正因子?定量校正因子: 是定量计算公式中的比例常数, 其物理意义是单位响应值( 峰面积) 所代表的被测组分的量?测定未知组分的响应值, 通过定量校正因子即可求得其含量液相色谱定量分析的基本步骤液相色谱定量分析的基本步骤液相色谱定量分析的基本步骤液相色谱定量分析的基本步骤?开发一个适合定量分析的色谱方法: 确认被检测组分峰, 并达到分离度(R) 大于 确定被测组分色谱峰的一致性确定方法的检测限及定量限; 灵敏度及线性范围?用不同浓度的标准样品建立校正曲线?考查定量方法的准确度及精密度?用 M32 色谱管理系统实施样品采集, 数据处理及报告结果鉴别需定量的色谱峰鉴别需定量的色谱峰鉴别需定量的色谱峰鉴别需定量的色谱峰( 定性定性定性定性) ?定性鉴别每个要定量的色谱峰?通过比较保留值( 通常是保留时间) 的方法, 找到各色谱峰所对应的组份?大多数情况下用与标样比较保留时间来定性?即所谓: ?保留时间相同, 可能可能可能可能是同样的组份?保留时间不同, 肯定肯定肯定肯定不是同样的组份用保留时间定性用保留时间定性用保留时间定性用保留时间定性?用“标样”的保留值定出被测组份的位置 A U Minutes Uracil Ethylparaben Propylparaben 进一步的确认进一步的确认进一步的确认进一步的确认( 定性定性定性定性) ?标准加入?同时用其他方法?其他色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) ?其他检测器? PDA ,光谱图比较、谱库检索? MS ,质谱图解析、谱库检索?其他仪器方法标准加入法举例标准加入法举例标准加入法举例标准加入法举例?废水样品中五***苯( PCP )的分析梯度曲线梯度曲线 PCP 4 ppm 3 ppm 2 ppm 1 ppm 确认定量峰的一致性确认定量峰的一致性确认定量峰的一致性确认定量峰的一致性?确认色谱峰的纯度?保证每个色谱峰下只有一个被测的组份?检查是否有共流出的物质(杂质)干扰?色谱峰纯度确认的方法?用光电二极管矩阵(PDA) 检测器比较光谱图?峰纯度鉴定,2487 双波长 RatioPlot ? 996 的纯度角理论色谱峰定性中常见问题色谱峰定性中常见问题色谱峰定性中常见问题色谱峰定性中常见问题?鉴定色谱峰( 定性) 时常见问题如下: ?被鉴定峰丢失?色谱图中出峰比预想的少?色谱图中出峰比预想的多( 鬼峰) 色谱峰定性中常见问题分析色谱峰定性中常见问题分析色谱峰定性中常见问题分析色谱峰定性中常见问题分析?被鉴定峰丢失?保留时间改变?数据处理系统中输入值不正确?色谱图中出峰比预想的少?样品分解?色谱柱分辨率丧失?用错流动相?梯度洗脱时平衡不足( 例如, 过早将手动进样器扳至(Load) 位置