文档介绍：免渡学实验故术抗体定义:指杋体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、:,早孕检测等医学应用治疗:单克隆抗体疗法(类风湿性关节炎多发性硬化症等),肿瘤治疔科研应用:免疫共沉淀、免疫印迹、染色质免疫共沉淀、免疫荧光技术、ELSA等COo-CoO多抗来源●动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞(浆细胞)和记忆B细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中,即为多克隆抗体多克隆抗体制备动物选择兔子(rabbit:最常用于自制抗体,抗体量较多。(新西兰,大耳小鼠(mouse):可用于自制抗体,但抗体量很少。(BALB/C,昆明鼠)大鼠(rat):可用于自制抗体,免疫过程要麻醉动物。(Wistar-大羊(shgoat):常用于较大批量地生产抗体(商品)马(horse):常用于大批量生产治疗用抗体(商品)。·豚鼠(guIneapig):国外实验室常用。基本步骤基础免疫:首次,抗加强免疫:第2次以后,抗抗原制备:原用量大,用佛式完原量减半,多次,间隔2-plate周,plateFreund含矿物油,卡介苗等)djuvand不含卡介苗取血测效价放血制备血清可一次放血(颈动脉)加强免疫两次或也可多次取血(耳静脉)三次以后的第7天取佐剂的作用机理:延长抗原的作用时间促进细胞因子分泌增强吞噬作用诱导淋巴细胞分裂、增殖刺激抗原提呈影响T细胞“极化实验方法新西兰大耳白,2000g(雌雄均可),健康,|抗原(~)05ml佛式完全佐剂(CFA)制备抗原-佐剂乳化液背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射加强免疫间隔2-4周,(蛋白量减半)(FA制备抗原-佐剂乳化液背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射实验方法●免疫34次以后从耳静脉取血检测效价酶联法:1:104以上,能达到1:106免疫双扩散:1:16以上,能达到1:64价达的的血备清也可多次取血(耳静脉)多抗的特点●多抗是单抗的混合物,因此多抗的性质是一个群体综合的●比单抗更容易捕捉抗原。因为含有抗不同表位的抗体,多种抗体都可与抗原结合。特异性相对较差:因为由不同性质的抗体组成,只要其交叉反应的抗体,多抗就有交叉反应,所以多抗更易有交叉反应。●抗体的纯化、标记比单抗难:因为含有各种不同类型、亚类的抗体,提纯、标记的方法有所差别。同时,血清中含有的杂蛋白比较多。什么情况下需要制备单克隆抗体●目的蛋白有结构类似物抗原不纯,无法分开多抗效果不好(已排除非特异性反应)希望将抗体用于治疗,研制成药品希望将抗体用于诊断,研制成诊断试剂单抗制备原理如果能选出一个单细胞经分裂增殖而势的案理除细舱合对一种抗原决1975年分子生物学家GJF克勒和C米尔斯坦在自然杂交技术的基建立杂交瘤技术,他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合,成为杂交细胞外无限增殖的特又具有抗体形成细胞的合成和分泌抗体的特点。将这种杂交瘤作单个细胞培养,可形成单细胞系,即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法,便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体,其结构、氨基酸顺序异性等都是一致的,而培养过程中,只要没有变异,不同时间所分泌的抗体都能保持同的结构与机能。