切片机数控系统.pdf

文档介绍：DATA SHEET


ProductInformation
Cystathionine {beta} Synthase(CBS mRNA)ISH Probe Kit
胱硫醚β-合酶
ProductNumber: CBS2008DIG
Size:60-100T
用途:

1 寡核苷酸探针预杂交液既用型 Product Number:FISH002 2ml
2 寡核苷酸探针杂交液 CBS 既用型 Product Number:FISH001CBS 2ml
寡核苷酸阴性探针杂交液 CBS
3 复合消化液(P/E)PH: 既用型 Product Number:TSP6044 6ml
4 生物素标记的小鼠抗地高辛既用型 Product Number:DB7405B 6ml
5 高敏过氧化物酶链亲和素复合物既用型 Product Number:AA7419H 6ml
6 DAB Kit 浓缩型 Product Number:D5637 3ml
7 2 X SSC 干粉 2000ml



CBS 多点标记的 DIG(地高辛)探针原位杂交基本的实验方法

一, 过氧化物酶显色系统
1, 石蜡切片脱蜡至水:二甲苯两次,10 分钟/次;无水乙醇 10 分钟一次;90%乙醇 10 分钟一次;
80%乙醇 10 分钟一次; PBS 冲洗三次。(细胞爬片/涂片/冰冻切片可省去此步骤)。
2, 置打孔液中室温 10 分钟,给细胞打孔以改变组织细胞的通透性使探针快速顺利的穿透
细胞膜。 PBS 冲洗三次。
3, 置过氧化氢封闭液室温 20 分钟,以封闭内源性过氧化氢酶。 PBS 冲洗三次。
4, 滴加复合消化工作液,覆盖组织表面,室温 10-30 分钟。(根据实验组织和实验的条件
情况确定消化时间和温度,需实验者摸索最佳条件。如条件成熟有利于杂交的顺利完成,具
体原理参照“组织细胞的通透性”和“复合消化液的配制”一章。 PBS 冲洗三次。
洗一次(室温 3 分钟)。
5, 滴加预杂交工作液覆盖组织 37 度湿盒孵育 1 小时,注意盖上原位杂交专用盖玻片
6, 预杂交后的洗涤——揭去盖玻片以 室温洗三次,每次洗涤 5 分钟。
7, 滴加杂交工作液覆盖组织 37 度湿盒孵育 2-4 小时.
8, 杂交后的洗涤——揭去盖玻片以 2Xssc 37 度洗三次,每次洗涤 5 分钟, 37 度
洗三次,每次洗涤 5 分钟, mol TBS 37 度洗 3-5 次每次洗涤 5 分钟。
9, 滴加小鼠抗地高辛生物素标记的抗体工作液
覆盖组织 37 度湿盒孵育 45 分钟。 PBS 冲洗三次,每次洗涤 5 分钟。
10, 滴加高敏过氧化物酶链亲和素复合物工作液。
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DATA SHEET


覆盖组织 37 度湿盒孵育 45 分钟。 PBS 冲洗三次,每次洗涤 5 分钟。
11, DAB 显色,光学显微镜下观察至细胞内胞浆阳性颜色与细胞外背景颜色对比度反差明
显时蒸馏水洗终止反应。细胞浆显棕黄色颗粒为阳性反应。苏木素复染,胞核为蓝色。
12, 80>90%>无水乙醇>二甲苯脱水,每步须 3-5 分钟,中性树胶封片保留。

探针浓度:8ug/ml 杂交液。
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