文档介绍：甘精胰岛素、地特胰岛素、人胰岛素对3T3-L1脂肪细胞PPARγ2mRNA表达的影响摘要:目的探讨人胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素对体外培养3T3L1脂肪细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)基因表达的影响及可能机制。方法体外培养3T3L1前脂肪细胞,在分化培养液分别加入100nmol/L、500nmol/L、1000nmol/L人、甘精、地特胰岛素培养10d,用RTPCR检测脂肪细胞中PPARγ2mRNA表达水平的变化。结果在细胞分化的过程中,胰岛素浓度的增高促进PPARγ2的表达;相同浓度下,人胰岛素促进PPARγ2mRNA表达最强,甘精胰岛素次之,地特胰岛素最弱。结论胰岛素通过上调PPARγ2基因表达促进前脂肪细胞的分化,不同胰岛素促分化能力不同。关键词:人胰岛素;甘精胰岛素;地特胰岛素;前脂肪细胞;PPARγ2 中图分类号::A文章编号:16721349(2012)08097102 糖尿病及其并发症对靶器官(心、脑、肾等)的损伤,严重威胁着人类的健康和生活质量。良好的血糖控制能够显著减少和延缓糖尿病并发症的发生和发展。长效胰岛素类似物延长了作用时间,无明显峰值,个体内变异小,更好的模拟了正常胰岛素的分泌。胰岛素可以提高前脂肪细胞的分化率,在前脂肪细胞转化中起着相当重要的作用。脂肪细胞的体积增大、数量增多或两者同时存在可引起脂肪组织增加。研究表明,仅少量的体重降低即可能降低糖尿病患者罹患心血管疾病的风险。目前,对胰岛素类似物的对比研究大多以临床研究为主,而基础研究甚少。胰岛素与其类似物对脂肪细胞的影响是否相同呢?本研究采用甘精、地特两种长效胰岛素类似物和人胰岛素分别诱导体外3T3L1前脂肪细胞分化,检测PPARγ2mRNA表达的变化,探讨胰岛素对PPARγ2mRNA调节的机制。 1材料与方法 (1∶1)培养基、胰蛋白酶购自Gibco公司;胎牛血清(FCS)购自杭州四季青生物有限公司;青霉素、链霉素购自华北制药股份有限公司;人胰岛素、3异丁基1甲基黄嘌呤(IBMX)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、地塞米松、二甲基亚砜(DMSO)均购自Sigma公司;地特胰岛素由诺和诺德公司提供;甘精胰岛素由甘李药业有限公司提供;细胞培养板购自Corning公司;Trizol试剂购自Invitrogen公司;RTPCR试剂盒购自Fermentas公司;FastStartUniversalSYBRGreenMaster(ROX)购自Roche公司;引物由上海生工生物工程技术服务公司合成。 ,用含有10%FCS的DMEM/F12培养基,置于37℃、5%CO2孵箱中培养,48h换液一次,待细胞融合生长后按1∶2传代,取同代的对数生长期细胞,将细胞按照5×104/mL接种于6孔培养板。待细胞达到90%贴壁后加入分化培养基,其中含胰岛素(每组分别含有人胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素100nmol/L、500nmol/L、1000nmol/L,另设对照组为10nmol/L人胰岛素),地塞米松250nmol/L、、,前4d用含IBMX的分化培养