文档介绍：EB病毒(EBV)核酸检测标准操作规程(荧光PCR法)(荧光PCR法)检测操作步骤,正确进行EB病毒DNA分析。(PCR)荧光定量检测试剂盒(荧光PCR法)和Mx3000P荧光定量PCR仪、Roche480荧光定量PCR仪进行EB病毒DNA检测。,专业技术人员负责实施,试验室主管负责监督实施。(EBV)特异性引物和一条EB病毒(EBV)特异性荧光探针,配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶(Taq酶)、核苷酸单体(dNTPs)等成份,用PCR体外扩增法检测EB病毒(EBV)DNA。用于人血中EB病毒DNA测定,为临床提供参考,:全血。;由合作单位根据以下要求进行采集。:用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升,注入EDTA(乙二***四乙酸二钠)或枸橼酸钠抗凝剂玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂和静脉血充足混匀,密闭送检。:标本可立即用于测试,也能够保留于-20℃待测,保留期为6个月。标本运输采取0℃冰壶。:中山大学达安基因股份。-20℃保留,在试验前5分钟取出备用,试验后应立即放回冰箱-20℃。,应立即更换。:随试剂盒,由厂家提供。:置于-20℃冰箱中保留。:每次试验均需做质控。:取出阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。8000rpm离心数秒,,加入50ulDNA提取液充足混匀,100℃恒温处理10±1分钟;1rpm离心5分钟,备用。,加入生理盐水500ul轻摇混匀;;(注意沿着管壁,速度要慢);(提议用水平离心机);(从上往下第二层),,1rpm离心5分钟;,沉淀中加入50ulDNA提取液充足混匀,100℃恒温处理10±1分钟;1rpm离心5分钟,上清备用。:取PCR反应管若干,加入处理后样品(标本、阴性质控品、临界或强阳性质控品)上清液5ul,8000rpm离心数秒,放入仪器样品槽。,编辑样本信息并按下列循环参数进行扩增反应:37℃-2min;94℃-2min;(94℃-15ses;55℃-45ses)×40cyclics;EBV检测荧光素:FAM;反应体系:50ul;荧光信号搜集:55℃-45ses,末端搜集。。,在大约1分钟时间内,仪器将会自检而且能听到滤镜轮转动声音。打开电脑上Mx3000P软件,确定软件界面右下面联机标志展现绿色。假如不是绿色而是红色,软件会提醒,这时只需要继续稍等片刻,待仪器自检完成,会自动连接计算机。,通常选择第一项“QuantitivePCR(MultipleStandards)”进行绝对定量分析。。(绿色)则说明卤钨灯已经打开;(黄色)则说明卤钨灯正在预热;(红色)则说明卤钨灯没有被打开,这时需要用鼠标点击这个标志将光源打开。在卤钨灯已经被打开情况下,软件界面右下方会显示(绿色)。。,对所选孔进行设定,在Welltype中设定Standard(标准品)、NTC(阴性对照)、unkown(样品)等,并选择正确荧光通道(FAM,HEX,ROX,Cy5),参比荧光(Referencedye)选None。对于标准品,在Welltype中设定为“Standard”后,再设定其模板浓度。方法为:点击,10倍浓度梯度能够直接点击,在下拉菜单中选择不一样系数关系后,依次点击设定为标准品另外多个孔,浓度将实时显示。也能够直接点击标准品各个孔位,在一栏,手工输入浓度。若要对不一样样品进行编号,则双击所选孔,在