生化大实验双向琼脂免疫扩散.ppt

文档介绍：双向免疫扩散试验一实验目的学****双向免疫扩散实验原理掌握双向免疫扩散实验操作方法基本概念抗原:抗原(antigenicity)是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答,并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合,发生免疫效应(特异性反应)的物质。抗体:抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。二实验原理双向免疫扩散是一种定性试验。将抗原、抗体分别加入琼脂板相对应的小孔中,使两者互相扩散,在比例适当处形成可见的沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、形状,以及对比关系,可对抗原或抗体进行定性分析,常用于:(1)抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。(2)用已知抗血清(或抗原)检测未知抗原(或抗体)(3)抗原或抗体相对分子量的估计双向免疫扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅花孔型(见图1)图1双向免疫琼脂扩散孔型○○○○○○○○○○○○○○:,,最后补水至1000ml,。:5g琼脂糖加500ml上述缓冲液,微波炉加热煮沸溶解。注意用中小火,以免暴沸。:I号峰、II号峰、、羊抗人LDL抗体、羊抗人apoA-I抗体。、微波炉、刻度吸管、培养皿、:用移液管吸取热琼脂20ml,平铺于直径9cm培养皿中。:待琼脂凝固后,按图1梅花孔型打孔,孔径2mm,孔与孔距离3-4mm。用针挑去孔内琼脂。、羊抗人LDL抗体及羊抗人apoA-I抗体各5-10ul加入周边孔中,中间孔加不同峰的液体。,于37℃温育,隔天观察结果。,培养皿必须保持水平位置。,既使每个孔都被加满,又必须不使样品溢出孔外。。??。