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文档介绍

文档介绍:临床基因扩增检验操作规范浙浙江江省省基基因因诊诊断断中中心心浙江大学医学院附属儿童医院浙江大学医学院附属儿童医院尚世强尚世强 1一、临床基因扩增检验实验室的一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其各室的功能规范化设置及其各室的功能二、各阶段操作要求二、各阶段操作要求三、三、 PCR PCR 污染与对策污染与对策四、因操作欠规范导致的问题分析四、因操作欠规范导致的问题分析 2一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其各室的功能规范化设置: 规范化设置: 要求参照《要求参照《临床基因扩增检验实临床基因扩增检验实验室管理暂行办法验室管理暂行办法》(卫医发》(卫医发[2002] 10 [2002] 10 号文)附件《号文)附件《临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室基本设置标准基本设置标准》。》。 3 1 1. . 四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。 2 2. 明确的标记,如加样器或试剂等。 3. ,从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区。 4. 。 5. 5. 实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。 6. 。 4各室功能: 各室功能: 5(一)试剂贮存和准备区功能: 功能: 贮存试剂的制备、试剂的分装和主贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备反应混合液的制备。。 6 含反应混合液的离心管或试管在含反应混合液的离心管或试管在冰冻前冰冻前都都应快速离心数秒。应快速离心数秒。戴手套。戴手套。工作结束后必须立即对工作区进行工作结束后必须立即对工作区进行清洁清洁。。实验台表面,使用可移动紫外灯( 实验台表面,使用可移动紫外灯( 254 254 nm nm 波长) 波长) 照射,一般照射过夜。照射,一般照射过夜。实验室及其设备的使用必须有实验室及其设备的使用必须有日常记录日常记录。。 7(二)标本制备区功能: 功能: 临床标本的保存,核酸( 临床标本的保存,核酸( RNA RNA 、、 DNA DNA ) )提取、贮存及其加入至扩增反应提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定管和测定 RNA RNA 时时 cDNA cDNA 的合成。的合成。 8 要要正确正确使用加样器。使用加样器。正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须须盖好盖好含反应混合液的反应管。含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料,必须有对具有潜在传染危险性的材料,必须有明确明确的样的样本处理和灭活程序。本处理和灭活程序。用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。用于用于 RNA RNA 扩增检测的样本制备好以后,应扩增检测的样本制备好以后,应立即立即进进行行 cDNA cDNA 合成。合成。 9(三)扩增区功能: 功能: DNA DNA 或或 cDNA cDNA 扩增扩增。。 10