文档介绍：研究对象:基因组DNA、质粒DNA、
总RNA、mRNA等
过程
裂解:破碎细胞,使细胞中
核酸提取的核酸游离在裂解体系中
纯化:使核酸与裂解体系中
的其它成分,如蛋白质、盐及
其它杂质彻底分离
核酸提取的主要步骠:

破碎细胞
—内容物释放
提取
l核畋分离、纯化
ⅣV沉淀或吸附核酸,并去除杂质
纯化
V核酸嵱解在量缓冲液或水中
总原则:
①应保证核酸一级结构的完整性;
②排除其它分子的污染。
鉴定:浓度、纯度、完整性
鉴定技术:分光光度技术、凝胶电泳技术
第一节预处理
样品预处理
1、组织
组织有新鲜组织、甲醛固定或石蜡包埋组织。
新鲜组织先用生理盐水洗,然后将其捣碎或剪碎,
加液氮研磨成粉状,加细胞裂解液裂解细胞;
甲醛固定组织要先去掉甲醛;
石蜡包埋组织要经过组织切片和二甲苯脱蜡等处理
2、培养细胞
培养细胞需弃细胞培养液,用缓冲液进行多次
漂洗,方可用于提取核酸。
3、血液
血液可以是新鲜血液或者冻贮血液;
注意抗凝剂的选择,一般用 EDTA-Na2或枸橼
酸钠,不可使用肝素;
全血离心弃血清(或血浆)、加适量的红细
胞裂解液(破膜液),裂解红细胞,再加适量
的细胞核裂液(破核液),裂解白细胞中的细
胞核,使核内DNA释放出来
1、提取RNA所用器皿的处理及溶液的准备
塑料制品:使用灭菌的一次性用品。‰DEPC
水浸泡或用***仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被***仿
腐蚀,故不能使用***仿处理)。
玻璃用品:使用前于180℃的高温下干烤6h以上,或
在220℃下干烤3h以上。
有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,
乙醇干燥,再用3‰H2Q2室温浸泡10min,%
DEC水冲洗,晾干。
RNase污染的控制
在涉及RNA的一切操作过程中,都应戴
次性手套和口罩,应勤换手套