文档介绍：浅谈流式细胞仪技术
Flow Cytometer
月录
流式细胞仪的历史
(2
流式细胞仪的结构及工作原理
流式细胞仪在细胞凋亡上的应用
4例证
流式细胞仪的历史
History of FCM
1950汇 asperse
Uv)见光是
式
速用好輸流理晟幗翔额经驶北浥抗体
枘计翻浮细彤线的梁種姊利挑恍信号;1975年,
血细胞计数器装置成为流细的的角祖s提出单克隆抗体技术
年, Beirne和 Hutcheon发明撒研擻的特异性免疫试剂的应
用奠定基础
1950
1960
1970
1950年
1970
1934年 Moldaven是世界上最早设想使血动仙tsky等提出设想:
的人;1936年 Caspersson等引入洲废窆堑细胞成分;结合测量值对细胞
年 Coons提出用结合荧光素的抗体去橚朓协特 Kamemtsky和 Melamed
白;1947年 Guclcer运用层流和湍流原雜制烟雾褆糨细胞分选的方法;1969
计数器;1949年 Coulter提出在悬液数粒触方油 wyler及其同事们发明第一台
并获得专利
荧光检测细胞计。
FMf
流式细胞仪的结构及工作原理
Components and principle of FCM
◆(一)流动室与液流驱动系统
样本压力和鞘液压
进样孔
力是不同的,且样
本压力总是大于鞘
液压力。样本压力
调节器通过改变样
y本压力的方法控制
样本流速
荧光信号
鞘液
激光束
区的时间和等,从而得到准佣的细胞灾光信恳。
流式细胞仪的结构及工作原理
Components and Principle of FCM
(二)激光光源与光束形成系统
目前台式机FcM,大多采用氩离子气体激光器。
流式细胞仪通常以激光作为激发光源经过聚焦整形
后的光束垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在
激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两种信号
同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管
(PMT)接收。光散射信号在前向小角度进行检测称
为前向散射( forward~FsC),这种信号基本上反
映细胞体积的大小90°散射光又称侧向散射(sde
scatter ssc),是指与激光東2液流平面垂直的散射
光其信号强度可反映细胞部分结构的信息
流式细胞仪的结构及工作原理
Components and Principle of FCM
图4-4光线通过长通滤片、短通滤片及带通滤片的波长范
FcM的光学系统中主要光学原件是滤
FcM的光】光片,主要分成3类:长通滤片
学系统
(long- pass filter,LP)、短通滤片
( short- pass filtr,sP)及带通滤
流式细胞仪的结构及工作原理
Components and Principle of FCM
(四)信号检测与分析系
散射光
荧光
信号
当细胞携带荧光素标记物通过激光照射区时,受激光激
发产生代表细胞内不同物质、不同波长的荧光信号,这
些信号以细胞为中心,向空间360°立体角发射,产生
散射光和荧光信号
流式细胞仪的结构及工作原理
Components and principle of fcm
(四)信号检测与分析系
散射光信号
散射光分为前向
角散射
(forward
(2)侧向角散射
scatter,Fsc)\(1)前向角散射:侧向角散射是指
和侧向角散射
前向角散射与被与激光束正交
( side scatter,/关
测细胞的大小有90°方向的散射
SSc)
光信号,可提供
有关细胞内精细
结构和颗粒性质
的信息
流式细胞仪的结构及工作原理
Components and principle of FCM
激光
0
前向角散射
侧向角散射