石蜡切片制作.ppt

文档介绍：一、实验目的与要求:
掌握石蜡切片制作的基本过程及其注意事项。
二、实验材料和仪器:
实验材料: 向日葵幼茎、石蜡、酒精、二甲苯、番红/固绿染色液等;实验仪器和器皿:石蜡切片机、展片机、染色缸、载玻片、盖玻片等。
三、实验内容与方法:
。
。
四、作业:
提交制作合格的向日葵幼茎石蜡切片。
实验九石蜡切片制作
石蜡制片的基本步骤









、透明和封固

材料来源及部位。
①种类
②部位
③发育阶段
④是观察横切面还是纵切面?
取材原则:
动作:快,轻,用力均匀
体积合适
刀要锋利
2. 杀死与固定
目的---杀死各种酶,保持细胞的结构
固定液
固定时间
固定后的处理
最常用的固定液为FAA。固定时间不受限制,短则
数小时,长可延至数月或数年。
配方: 50%或70%酒精 90毫升 冰醋酸 5毫升 福尔马林 5毫升 柔软材料用50%酒精,坚硬材料用70%酒精配制。
卡诺氏(Carnoy’s)固定液:有极强的渗透力
固定根尖和花药只需40-60分钟,时间太长不好(不能超一天)。
固定后用95%酒精冲洗,在组织不能立即处理时,需转入70%酒精中保存。配法有两种:
固定组织时应注意:
①保持组织新鲜,勿使其干燥,尽快固定处理。
②组织块不易过大过厚,。
③固定液必须有足够的量,一般大于组织20倍以上。
④抽气:使固定液尽快渗入材料内部,并排除材料内气泡的干扰。
组织固定后的处理
①冲洗或漂洗:组织固定后应充分水洗,除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。
②材料经过固定后,需要保存下来以备利用,通常使用的保存剂是70%的酒精溶液,可以使一般的材料保存较长的时间而不至于变坏。
③通常在冰箱中4℃存放。
3. 脱水
水和透明剂不能互溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进入。
凡用酒精配制的固定液,一律用同浓度的酒清洗。
酒精为常用脱水剂,它既能与水相混合,又能与透明剂相混。为了避免组织材料的急剧收缩,应按从低浓度到高浓度递增的顺序进行.
30%--50%---70%---85%---95%--100%--- 100% 每步30-60分钟左右。
要求及注意事项
保证脱水梯度和每一步脱水时间,水要完全脱净。
不同大小的组织块脱水时间不同。
不能过度脱水(过久使组织变脆、收缩)
在50%酒精中加入曙红,用于染色。
材料可以放在70%酒精中保存。
正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陆环等也可做脱水剂。