文档介绍：正相柱反相柱的使用
特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：
1、 先用100%勺纯水冲洗，打开排放阀，用 3~5ml/min的流量，洗二十分 钟左右后停泵。此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空 间的清洗
2、 再用95: 5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量, 洗30~60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用 5%勺甲醇主要 是为了保护色谱柱。
3、 最后用100%勺甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右, 然后关机。如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱 •若
固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱 •在用
于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相， 在用于反相色谱时，可使用甲 醇或水的强极性流动相•正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica )以及其他具 有极性官能团胺基团，如(NH2 APS和氰基团(CN CPS的键合相填料。这 种填料做成的柱子就称为正相柱•反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键 合有极性相对较弱官能团的键合相，常用的反向填料有：C18(OD$、C8(MOS、 C4 (Butyl )、C6H5( Phenyl ).
正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。若固定相极性大于 流动相，为正相柱，反之，为反相柱。通常为反相柱应用较多。所有色谱均适用, 包括纸色谱和薄层。
现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。 正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。
反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别
本质上是填料(固定相)的不同，正相色谱柱填料极性强，洗脱顺序由弱到强；反相 色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明：
1、 正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶 (Silica )以及其他具有极性官能 团胺基团，如(NH2 APS和氰基团(CN CPS的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是 依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。 正相色
谱使用的流动相极性相对比固定相低， 如正已烷(Hexane，氯仿(Chloroform
二氯甲烷(Methylene Chloride )等。
2、 反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质， 表面键合有极性相对较弱官 能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、 乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极 性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18 (OD$、C8 (MOS、C4( Butyl )、C6H5( Phe nyl)等。
色谱的正反相是根据固定相和流动相的相对极性比较而区分的。一般情况如下： 正相色谱：固定相极性大于流动相极性：常见的色谱柱有：硅胶色谱柱、氨基色 谱柱、苯基色谱柱、氰基色谱柱等。
反相色谱：固定相极性小于流动相极性：常见的色谱柱有： C18色