文档介绍：酶联免疫分析法
酶联免疫分析法酶联免疫分析法第七章 酶联免疫分析法第一节 酶联免疫分析概述
第二节 光度酶联免疫分析
第三节 发光酶联免疫分析2020/11/32
第七章 酶联免疫分析法
第一节 酶联免疫分析概述
第二节 光度酶联免疫分析
第三节 发光酶联免疫分析
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第一节 酶联免疫分析概述
一、免疫分析
1、免疫分析发展史
免疫分析（Immunoassay，IA）是利用待测物质（抗原或抗体）与其相对应物质（抗体或抗原）之间专一特异性反应而建立起来的一种高选择性分析方法。
免疫分析主要基于用抗体（或抗原）作为选择性化学试剂以分析测定抗原（或抗体）及半抗原。
宋代 人工痘苗预防烈性传染病天花
1971年 第一届国际免疫学会议 将免疫学与微生物学分开发展成一门独立的学科。
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“免疫（immunity）”一词源于 “immunitas”，原意是免除税赋和差役。
研究早期免疫学多集中在抗体抗感染能力研究。
20世纪中期以后，人们逐渐开始对各种抗原、微生物的作用进行研究，发展出基础免疫学、临床免疫学、免疫学检测、医学免疫学等多个分支。
现代免疫学将“免疫”定义为：机体对“自己”和“异己”识别、应答过程中所产生的生物学效应的总和，正常情况下是维持内环境稳定的一种生理性功能。
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2、抗原、抗体与免疫反应
抗原是能够引起免疫反应的分子。
免疫原性（immunogenicity）指诱导刺激免疫系统产生抗体或致敏淋巴细胞的能力。
具有免疫原性的物质称为免疫原（immunogen）。
免疫反应原性（immunoreactivity）或抗原性（antigenicity），指能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合，引起免疫反应的性能。
具备上述两种特性的物质为完全抗原，仅具有免疫反应性的物质被称为半抗原（hapten）。
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抗体是能与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
所有的抗体都是免疫球蛋白，但并非所有的免疫球蛋白都是抗体。
例如无免疫活性的免疫球蛋白（如骨髓瘤蛋白）就不是抗体，尽管其结构与抗体相似。
抗体主要存在于血清内，但在其他体液及外分泌液中也有存在。
抗原抗体分子之间存在着结构互补性和亲和性，使得抗原与相应抗体之间极易发生结合反应，这种反应具有高特异性（即专一性）和可逆性。
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抗原、抗体发生如下免疫反应：
Ag+Ab Ag-Ab
该免疫反应遵循可逆生物大分子相互作用的热动力学基本原理，其反应式为
式中：[Ab]为游离的抗体结合位点的浓度；[Ag]为游离的抗原结合位点的浓度；[Ab-Ag]为抗原-抗体复合物的浓度；k1为正反应速率常数；k2为负反应速率常数；K为反应平衡常数（亲和常数）。
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这种抗原-抗体反应既可发生于体内（in vivo），也可发生于体外（in vitro）。
抗体主要存在于血清中，在抗原、抗体的检测中多采用血清做试验，所以体外抗原-抗体反应也称为血清学反应（serologic reaction）。
基于抗原-抗体反应的检测技术主要应用于以下几个方面：①用已知抗原检测未知抗体；
②用已知抗体检测未知抗原；
③定性或定量检测体内各种大分子物质；
④用已知抗体检测某些药物、激素等各种半抗原物质。
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二、酶标记免疫分析法及常用标记酶
1、免疫分析法分类
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2、酶标记免疫分析法中使用的酶
（1）酶联免疫分析中使用的酶应符合下列条件：
①纯度高、催化反应的转化速率高、专一性强；
②具有足够的偶联用标记基团，与抗原、抗体蛋白分子偶联后仍保持较高的催化活性；
③使用稳定性和保存稳定性好；
④测定酶活性的方法简便、灵敏、快速；
⑤待测体液中不存在与标记酶相同的酶；
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