文档介绍：东华大学
硕士学位论文
荧光定量PCR方法检测邻苯二甲酸酯的研究
姓名:白舟
申请学位级别:硕士
专业:环境科学
指导教师:赵晓祥
2012-01
荧光定量椒ḿ觳饬诒蕉姿狨サ难芯摘要邻苯二甲酸酯是塑料的增塑剂,被广泛应用于塑料工业,普遍存在于土壤、底泥、水体、生物、空气及大气降尘物等环境样品中。关于邻苯二甲酸酯的检测有气相色谱法、液相色谱法、气相色谱一质谱法甅、荧光法等。用色谱法检测不但昂贵费时,而且分析过程繁琐冗长。近年来,随着生物技术的发展产生了许多邻苯二甲酸酯的生物检测方法。以核苷酸胶体染料一近年来出现的具有高灵敏度的定量椒ā作为雌激素受体的配体,能够与雌激素受体结合并能诱导雌激素受体介导的基因表达。本文建立一种利用核酸外切酶保护一荧光定量治龇椒ㄓ糜诩觳饬诒蕉姿狨ァT诖趁盖斜;せ上,进一步利用:怂崦竿耆谐鼸盖泻罅粝碌牡チ矗褂卫的荒鼙焕┰觯⒔岷蟂ü舛縋技术进行检测。将建立的外切酶保护一荧光定量椒ㄓτ糜谒蠵含量的检测。并且,本实验还与—检测邻苯二甲酸脂的方法进行了比较。实验成果如下:;〉挠ü舛縋是
ü河谑谐〉睦鹩惚┞队谝欢ㄅǘ鹊牧诒蕉姿嶂醒毖桓月后,取其受体用于实验,通过电泳发现,经过邻苯二甲酸脂暴露过的荧光强度明显强于未暴露的一组鲤鱼。这证明了有外界环境激素邻苯二甲酸脂存在的情况下,可以刺激鲤鱼产生更多的受体。,在加入邻苯二甲酸脂标准溶液浓度为’玪∥段冢诒蕉姿嶂涮迮ǘ扔胧芴逡慌体复合物的煊η慷戎涑氏咝怨叵担砻魇芴逵肱涮宓母春隙臼笛榉直鸾辛顺9鍼与荧光定量笛椤5玫搅肆苯二甲酸脂浓度与值的关系:.。蜭时,线性关系显著。而当进一步降低邻苯二甲酸脂浓度时,检测结果为阴性,从而确定本实验中荧光定量ǘ粤诒蕉姿脂的最低检测限为蜭。臼笛榛菇ü,,检测限为巧∥?。臼笛榛菇ü舛縋检测邻苯二甲酸脂的方法应用到了环境样品的检测中,确定了环境样品中邻苯二甲酸脂的含量,结果表明,该方法准确、可行。综上所述,本实验成功地建立了邻苯二甲酸脂的荧光定量嗖夥椒ǎ梅椒ḿ觳庀薜停槊舳雀撸既沸院茫很好。
抗干扰性强,而且简单易行,可以将作为一种新的快速准确监测环境关键词:环境激素;邻苯二甲酸脂;荧光定量缓怂嵬馇忻窱中痕量邻苯二甲酸脂的方法。
刚,昀印癿彻瑃啪吐,诵,谢,,.籹访..,,,,,,猰.,:瑃缸餰瓻阰
鷌衄鷓琫衲砌姗鍰籶’篊一痵,甌一∥一蜭酣∥甀餸,.~疞,.瓹仃痵,甌—琺,—.Ⅱ膌琱琯..,琲仃“Ⅱ,
第一章绪论环境激素环境激素邻苯二甲酸酯的概述侵竿庠葱愿扇派镉肴颂錔下常内分泌机能的化学物质【】,具有类似雌激素的作用,主要随人类生产和生活排放到环境中。环境激素最早出现于世纪年代,至今已经有年左右的历史。最初的环境激素是采用人工合成的方法生产的,它是作为医药品的雌性激素,伴随工业生产的发展,新的环境激素物质不断被合成。环境激素在给人类带来便利的同时,也出现了意想不到的负面影响。环境激素被大量释放到环境中,又被生物体吸收并在体内浓缩,发挥和生物体内正常分泌才产生的激素同样的作用,使很多野生动物和人体出现了一系列生理异常现象【俊环境激素是继臭氧层破坏、温室效应之后又一全球性的重大环境问题。前二者对生态环境的影响是渐进的,通过采取有效措施,可以缓解破坏程度,而环境激素一旦存在,即使是极微量也会造成生物体的激素分泌失调。更为严重的是:由于其毒性作用的潜伏期长,当危害表现时已对物种和生态环境产生灾难性的影响【俊;肪臣に匚侍庖咽艿绞澜缧矶喙艺喙匮芯垦д吆陀泄毓首橹高度重视,被视为世界范围的大环境问题之一,已经成为国际上环境科学领域中的热门研究课题。据目前研究,已有约种化学物质显示出不同程度的雌激素活性,并被确认为环境激素类物质。主要分属于烷基酚、烷基酚聚氧乙烯醚、双酚邻苯二甲酸盐蝓⒍嗦攘1嚼唷⑴┮如有机氯农药⒗喙檀嫉取‘。邻苯二甲酸酯类化合物,又称酞酸酯,一般为无色油状黏稠液体。作为增塑剂,在塑料它可增加聚合物材料的延展性和柔软度,因而常作为聚氯乙烯⑾宋厥髦⑻烊幌鸾汉秃铣上鸾旱脑鏊芗粒⒕哂谢臃⑿小,耐热性、耐光性和耐寒性好等特点,可改善募庸ば浴K员还惴旱应用于塑料制品生产中,如食品包装材料、化妆品、医疗器具、玩具等行业】。
邻苯二甲酸酯雌激素效应的作用机理作为增塑剂,在塑料制品中的含量占%~%左右,有时可高达%。自上世纪年代聚氯乙烯媸酪岳矗琍偷玫酱蠊婺5纳D壳埃它占了全球增塑剂市场的%以上【】。除了作为增塑剂外,还广泛应用于油漆、粘合剂、驱虫剂、化妆品、香料和润滑剂的生产原料⋯】。在德国,每年的的消耗达到吨,其