文档介绍：生物化学试验汇报
姓名：

学号：

专业年级：

组别：
生物化学和分子生物学试验教学中心
试验名称
血清清蛋白、γ-球蛋白分离、纯化和判定
试验日期

试验地点

合作者

指导老师

评分
XX
老师署名
李某某
批改日期
2013-06-03
格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。
试验目标
1、掌握盐析法、凝胶层析法、离子交换层析法分离蛋白质原理和基础方法。
2、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法原理和基础方法。
3、了解柱层析技术。
试验原理
1、粗提（盐析法）：
蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定原因：表面电荷和水化膜。当维持蛋白质稳定原因破坏时，蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出。盐在水溶液中电离所形成正负离子可吸引水分子，从而夺取蛋白质分子上水化膜，还可中和部分电荷使蛋白质分子聚集而沉淀，从而达成盐析沉淀蛋白质目标。因为血清中多种蛋白质颗粒大小、所带电荷多少及亲水程度不一样，所以，利用不一样浓度硫酸铵溶液分段盐析，便可将血清中清蛋白和球蛋白从溶液中沉淀出来，达成初步分离清蛋白、球蛋白目标。
2、脱盐（凝胶层析法）
  凝胶层析法利用蛋白质和无机盐类之间分子量差异。当溶液经过凝胶柱时，溶液中分子量较大蛋白质因为不能经过网孔进入凝胶颗粒，沿着凝胶颗粒间间隙流动，所以步骤较短，向前移动速度较快，最先流出层析柱
。而盐分子量较小，可经过网孔进入凝胶颗粒，所以步骤长，向前移动速度较慢，较晚流出层析柱。从而可达成去盐目标。
3、纯化（离子交换层析法） 
  离子交换是溶液中离子和交换剂上离子进行可逆交换过程。带正电荷交换剂称为阴离子交换剂；带负电荷交换剂称为阳离子交换剂。本试验采取DEAE纤维素是一个阴离子交换剂，溶液中带负电荷离子可和其进行交换结合，带正电荷离子则不能，这么便可达成分离纯化目标。 
脱盐后蛋白质溶液尚含有多种球蛋白，利用它们等电点不一样可进行分离。血清中多种蛋白质pI各不相同，所以，在同一醋酸铵缓冲液中，各蛋白质所带电荷不一样，能够经过DEAE离子交换层析将血清清蛋白和γ-球蛋白分离出来。 
4、纯度判定（电泳） 
采取醋酸纤维素薄膜电泳对分离得到清蛋白和γ-球蛋白进行纯度判定，以正常血清样品作对照。比较二者电泳图谱可定性判定纯化清蛋白和γ-球蛋白纯度。
三、材料和方法：以步骤图示意
材料：
样品：健康人血清（新鲜、无溶血、无沉淀物或细菌滋生）
试剂：、、、-、饱和硫酸铵溶液、（20%）磺基水杨酸、（1%）BaCl2溶液、氨基黑染色液、巴比妥缓冲液、漂洗液。
仪器及器材：层析柱、烧杯、移液枪、加样枪、试管、滤纸、醋酸纤维素薄膜、黑色反应板、铁固定