文档介绍：高中生物选修３基础知识总结
专题一 基因工程 原理：基因重组
基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在ＤＮA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DＮA重组技术。 定向改造生物的遗传性状.
(一）基因工程的基本工具
１．“分子手术刀"-—限制性核酸内切酶（限制酶)
(1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
基因工程的别名
 基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
 生物体外
操作对象
 基因
操作水平
 ＤNA分子水平
基本过程
 剪切→ 拼接→导入→ 表达
实质
 基因重组
结果
 人类需要的基因产物(定向的)
（2)功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列（回文序列）,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。(注意“酯”的写法）
（3)结果：经限制酶切割产生的ＤN***段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2.“分子缝合针"——DNA连接酶
(1)两种DＮA连接酶（E·ｃoliDNA连接酶和
T4ＤNA连接酶)的比较:
①相同点:都缝合磷酸二酯键.
②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DN***段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而Ｔ４ＤNA连接酶来源于T4噬菌体，能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。
(2)DＮＡ聚合酶、RＮA聚合酶和DNA连接酶的比较：
3．“分子运输车"-—载体
(1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存. ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA
片段插入。③具有标记基因,供重组DNＡ的鉴定和选择。 ④安全无毒 ⑤大小合适
(2）最常用的载体是 质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子.
（３）其它载体: 噬菌体的衍生物、动植物病毒
(二）基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
１．目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 或 具有调控作用的因子。
:从基因文库中获取;PCR扩增目的基因;人工化学法合成。
３。PCR技术扩增目的基因
(1）原理：ＤNA复制
（2）过程：第一步：加热至90~95℃ＤNA解链；第二步:冷却到55～60℃，引物结合到互补DＮA链；第三步:加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶（Taq酶)从引物起始互补链的合成。
（3)条件:模板、耐高温的DＮA聚合酶(Taq酶）、引物、脱氧核苷酸、精确的温度控制、能量
第二步：基因表达载体的构建
：使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用.
：目的基因＋启动子+终止子＋标记基因(﹢复制原点）
(1)启动子：,位于基因的首端,是ＲＮA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mＲNA,最终获得所需的蛋白质。
(2)终止子:终止目的基因的转录。也是一段有特殊结构的DN***段 ,位于基因的尾端。
(3）标记基因的作用：是为了鉴