文档介绍：细胞生物专家
Cell Counting Kit-WST-8试剂盒
试剂盒反应原理简介：
Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是检测细胞增殖、细胞存活和细胞毒性的试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用快速高灵敏度检测试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用水溶性四唑盐-WST-8，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈良好线性关系。
 
图1. WST-8化学结构和反应原理图
WST-8是MTT的一种升级产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。第一，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液(如DMSO等)来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤，减少误差。其次，WST-8产生的formazan溶解度远远大于XTT和MTS产生的formazan。第三，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。远达晶美研制的CCK-8试剂盒全部采用高纯原装进口原料，经过至少35种细胞检测其OD值与细胞数目的线性关系(r2>)且无细胞毒性。
★ 灵检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
★ 操作简便，省时省力
★ 水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞
★ 无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低
★ 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响
★ 无需预制，即开即用
★ 适合于高通量药物筛选
细胞生物专家
试剂盒使用说明：
1. 接种细胞悬液于96孔板中，100 µL /孔，每孔细胞数量>1000(如采用其他24/48孔板，培养体系中的溶液量和细胞数目按照比例扩大)。将培养板在培养箱预培养 (在37℃，5% CO2的条件下稳定过夜或>5小时)。
2. 做细胞数目测定实验时，向每孔加入10µL CCK-8溶液（采用24/48孔板，加入CCK-8溶液的量按比例增加，如400µl细胞培养体系中加入40µl CCK-8溶液），本步请注意不要生成气泡，)。
3. -4小时（可间歇在酶标仪上测定，选择最佳的时间点），大部分细胞1-2小时合适（37℃，5% CO2的条件下）。
4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度（OD值）。
5. ，打算以后测定的话，向每孔中加入1% w/v SDS溶液或