文档介绍：选修3《现代生物科技专题》知识点总结
专题1 基因工程
基因工程的概念
概念：按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA重组和转基因技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基本原理：让目的基因在受体细胞内稳定且高效的表达
理论基础:DNA是生物遗传物质的发现，DNA双螺旋结构，遗传信息传递方式
核心：构建重组 DNA分子
（一）忑因工程的基本工具
1•“分子手术刀”一一限制性核酸内切酶（ 限制酶）
（1） 来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2） 功能：能够 识别双链DNA分子的某种 特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有专一性。
（3） 结果：经限制酶切割产生的 DN***段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
注意：用同种限制酶分别切割目的基因和载体从而形成相同的粘性末端，然后用 DNA连接酶将目的基因和载体连接起来 ,有时用不同限制酶也可以形成相同的粘性末端，
用两种限制酶切割使目的基因和载体两端各形成两种粘性末端，防止载体和目的基因自身环化
2•“分子缝合针” 一一DNA连接酶
（1） 两种DNA连接酶（E • coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：
相同点：都缝合 磷酸二酯键。
区别：E・coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链 DN***段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而 T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效
率较低。
（2） 与DNA聚合酶作用的异同：
DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶是连接两个 DN***段的末端，形成磷酸二酯键。
DNA连接酶
DNA聚合酶
不同点
连接的DNA
双链
单链
模板
不要模板
要模板
连接的对象
2个DN***段
单个脱氧核苷酸加到已存在的单链 DN***段上
相同点
作用实质
形成磷酸二酯键
化学本质
蛋白质
3.“分子运输车” 载体
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
具有一至多个限制酶切点，供外源 DN***段插入。
具有标记基因，供重组DNA勺鉴定和选择。
（2） 最常用的载体是 质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状 DNA分子。
（3） 其它载体：入 噬菌体的衍生物、动植物病毒
第一步：目的基因的获取
目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。
原核基因采取 直接分离获得，真核基因是 人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法 _和化学合成法_。
PCR技术扩增目的基因
PCR勺含义：是一项在生物体外复制特定 DN***段的核酸合成技术。
目的：获取大量的目的基因
原理：DNA双链复制
过程：第一步：加热至 90〜95 C DNA解链为单链，断裂氢键；
第二步：冷却到 55〜60 C,引物与两条单链 DNA结合，形成局部双链 DNA
第三步：加热至 70〜75 C,热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。
特点：指数(2)形式扩增
使用的前提：已知目的基因的一段核苷酸序列 第二步：基因表达载体的构