文档介绍：乙型肝炎病毒cccDNA ——检测方法与应用价值
1
医学PPT
一、几个相关问题简介
2
医学PPT
什么是HBV cccDNA?
即共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA)。乙肝病毒感染宿主细胞后在细胞内复制并建立感染状态，病毒松弛环状DNA（rcDNA）进入细胞核，利用宿主DNA聚合酶和拓扑酶等“修复”形成的、结构完整的、超螺旋双链DNA分子。
3
医学PPT
乙型肝炎病毒基因组结构示意图
4
医学PPT
乙型肝炎病毒的复制过程
5
医学PPT
我们为什么要关注HBV cccDNA?
cccDNA存在于细胞核内，成为乙肝病毒的复制“池”
目前尚没有可以进入细胞核内，并能够清除cccDNA
的药物，这也是现有抗病毒药物治疗效果不佳和治
疗后容易复发的原因之一
肝脏以外器官组织细胞可能存在cccDNA，成为肝脏
移植术后乙肝复发的来源
还没有稳定、可靠、敏感的cccDNA检测试剂盒问世
6
医学PPT
为什么没有cccDNA检测试剂盒问世?
·研究和开发该检测技术的时间不长
·检测技术上的难度较大
·前期研究主要集中于细胞模型和动物肝脏
模，不能满足临床检验的需求
·现有技术灵敏度不高，检测低限104 copy
/ml左右
·分研究机构和学者对检测技术的特异性认
识不足，存在缺陷
7
医学PPT
·多种同源的乙肝病毒DNA分子并存(cccDNA、
rcDNA、ssDNA、整合的HBV DNA），必须有
效地分离cccDNA和其他类型的病毒DNA
·如何进一步解决特异性的问题？
·如何解决灵敏度不高的问题（细胞内cccDNA
含量的较低），血清中含量？
·如何简化检测步骤？
建立cccDNA检测技术必须克服的难点
8
医学PPT
cccDNA
rcDNA
核酸一级结构
完整的双链
两条链均不完整
核酸空间结构
闭合环状，超螺旋
松弛环状，非超螺旋
是否与蛋白质结合
不结合
共价结合
对某些核酸酶抗性
强，不容易被降解
弱，容易被降解
分离cccDNA和rcDNA的分子基础
分离cccDNA和rcDNA的任何手段均基于上述差异
9
医学PPT
二、HBV cccDNA检测技术
10
医学PPT