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实验一'
勺培养细胞的染色体制备及观察
多:
代课老师：五且昆
概述:
FTO体（CH,血肚血丿！是遗传物质的载体,由 DNA
和蛋白质等构成，具有储存和传递遗传信息 的作用；
A各种不同生物的染色体数目，形态，大小各具 特征，而在同一物种中，染色体的数目，形态是 恒定的；
A染色体和染色质是同一物质在不同细胞周期, 执行不同生理功能时不同的存在形式；
染色质(Chromatin) 染色体(Chromosome)
核型分析时对细胞进彳刊寺殊 处理，使较多细胞处于有丝 分裂中期・获得有丝分裂中 期的染色体
定义
■在细胞的牛长周期中，川期染色体的长 短、人小、恒定性正适合我们对其进行 分析、研究。
■因此利川人丁的方法，使大部分分裂细 胞处于屮期而不向后期转化，并获得Z, 经处理，制片后观察分析。
实验目的
1 •了解培养细胞染色体标本的制备技术。
。
3•学****独立完成一个实验的操作和分析。
二、卖验原理
在骨齟细胞中，有丝分裂的指数是相当高的, 通过注射秋水仙索使止在分裂的细胞停止在有丝 分裂中期，再经过低渗、固定、滴片就可以获得 大量的骨罰细胞染色体分裂相。
器材
■细胞株
■普通光学显微镜
■冰载玻片
■酒精灯
试剂
%胰口白酶液
KCL
秋水仙素
固怎液（冰醋酸/甲酹1:3）
Giemsa染液
人类染色体标本制备方法
一、人体外周血淋巴细胞染色体标本的制备（已经商品 化〉
肢珅：人体外周血的淋巴细胞是一种己成魁的不具们进行们 丝分裂能力的细胞，故不能直接用貝制备染色休标本。但淋巴细 胞金柏物凝蕖索（H1A）的刺激下，能转变为具自细胞分裂能力 的母细胞。W此，外周血必须经过含右PHA的培养液培养后，才 能制?^供核型分析染色体标木・
RPMI1640 液 小牛血胡
niA
収抗
细脳牛KWT
1、淋巴细胞培养液配制
80%
20%
适母（根押!厂家说叨乃的使用3）
100单位
100单負/岂升
适ul
最肩将Nil好培养液的般城丿良调PH=7. 2-7. 4,住无苗的条件S 辺行配制分装
•然眉进行分装，何瓶4. 5临升，冰柜保右*
胞养染体备 细培与色制
采血与培养 秋水仙素处理 低渗处理 预固定
固定 制片
正常人外周血或细胞
RPM11640培养基+15%小牛血清=5m I
■ 37叱，培养68 hr
加秋水仙素，培养2〜4 hr (抑制细胞分裂) ■收集细胞
离心，去上清液(1000rpm/10 min)
M KCI, 37乜，25(nin
预固定，甲醇：冰醋酸二3： 1
离心，去上清液(IOOOrpm/10 min)
*复固定三次
■
制片，染色，观察，染色体分析