文档介绍:面条中还原糖的测定
一、实验目的
掌握还原糖的测定原理
学习用比色法测定还原糖的方法
了解紫外可见分光光度计的使用方法
二、实验原理
在氢氧化钠和丙三醇存在的条件下,还原糖能将3,5-二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基,生成橘红色的化合物,其最大吸收波长为540nm,在一定的浓度范围内其吸光度与还原糖浓度成正比,符合朗博比尔定律定律,故可进行定量分析。
三、仪器与试剂
仪器:1000mL容量瓶、100mL容量瓶、十万分之一分析天平、电子天平、玻璃棒、具塞试管、比色管、水浴锅、紫外-可见分光光度计、石英吸收池、研钵、100mL烧杯、量筒
试剂:面条、80%乙醇、氢氧化钠、丙三醇、3,5-二硝基水杨酸、葡糖糖、盐酸、蒸馏水
四、操作步骤
:称取20g样品,置于250mL容量瓶中,加入200mL水,在45摄氏度水浴中加热1h,并不时振摇,冷却后加水至刻度,混匀,静置,沉淀。吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中。
四、操作步骤
2. 3,5-二硝基水杨酸溶液的制备: 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中,移入1000mL容量瓶中加入2moL/L氢氧化钠溶液325mL,再加入45g丙三醇,摇匀,冷却后定容至1000mL。
四、操作步骤
3. 10mg/mL葡萄糖标准溶液的制备:,加水溶解后移入100mL容量瓶中,(防止微生物的生长),用水稀释至100mL。
四、操作步骤
4. 葡萄糖标准系列溶液的制备:在5支10mL具塞试管中,分别加入10mg/mL葡萄糖标准溶液1、2、3、4、5mL,定容,得到一组浓度分别为1、2、3、4、5mg/mL的葡糖糖系列标准溶液。
四、操作步骤
5. 标准曲线的测定:取1、2、3、4、5、mg/mL,置于干燥的25mL比色管中,各加入3,5-二硝基水杨酸溶液2mL,置于沸水浴中2min,显色,然后以流动水迅速冷却,用水定容到25mL,摇匀,以蒸馏水为空白对照,在540nm处测定其吸光度,绘制标准曲线,计算回归方程。
四、操作步骤
6. 样液的测定:取样液1mL,分别置于干燥的25mL比色管中,3,5-二硝基水杨酸溶液2mL,置于沸水浴中2min,显色,然后以流动水迅速冷却,用水定容到25mL,摇匀,以蒸馏水作为空白对照,在540nm处测定其吸光度,算出吸光度平均值,代入回归方程,计算样品中还原糖的含量。